Субретинальное введение вирусных векторов в пигментный эпителий сетчатки на мышиной модели

Начните с мыши, находящейся под наркозом, и нанесите средство, расширяющее зрачок.

Под микроскопом откройте веко и слегка выпячивайте глаз, чтобы обнажить место инъекции.

Нанесите каплю офтальмологического вязкоэластичного раствора, затем наложите покровную накладку для визуализации сетчатки.

С помощью тонкой иглы создайте отверстие за соединением роговицы и склеры, избегая повреждения кровеносных сосудов и хрусталика.

Через это предварительно проколотое отверстие введите тупой шприц по касательной в субретинальное пространство рядом с пигментным эпителием сетчатки или РПЭ, который поддерживает нейроны сетчатки.

Введите лентивирусный вектор, несущий гены-мишени, в субретинальное пространство.

Наблюдайте за формированием субретинального пузыря из-за скопления жидкости, подтверждающего успешную доставку вектора.

Аккуратно закройте веко, чтобы закрыть место инъекции и дать мышке восстановиться.

Лентивирус проникает в РПЭ через эндоцитоз, высвобождает свой генетический материал и преобразует его в соответствующую ДНК, которая интегрируется с геномом хозяина, обеспечивая экспрессию генов.

Сначала приготовьте микролитровый шприц с тупой иглой 33 калибра. Простерилизуйте его с помощью газообразно