Внутримышечные инъекции по концевым пластинам двигателя для челночных индикаторов непосредственно в моторные нейроны крыс

Возьмите крысу под наркозом и нанесите глазную смазку.

Оббрейте целевую конечность, простерилизуйте кожу и расположите крысу так, чтобы обеспечить оптимальный доступ к целевой мышце.

Подтяните и надрежьте кожу, чтобы обнажить мышцу.

Обратитесь к фотографиям моторных концевых пластин или MEP, областей, где окончания аксонов моторных нейронов синаптически соединяются с мышечными волокнами, образуя нервно-мышечные соединения.

Мысленно нанесите карту области MEP на обнаженную мышцу.

Возьмите стеклянную микропипетку, содержащую флуоресцентный индикатор.

Введите индикатор внутримышечно в несколько точек вдоль области MEP.

Удалите излишки индикатора, закройте разрез и введите обезболивающее средство.

Инъекция повышает доступность индикатора в нервно-мышечных соединениях, облегчая его эндоцитоз в окончаниях аксонов.

Индикаторы, заключенные в везикулах, затем ретроградно транспортируются к телам клеток двигательных нейронов в спинном мозге.

Наличие метеных индикаторами моторных нейронов в спинном мозге предполагает нейротерапевтический потенциал MEP-адресной доставки.

Чтобы ввести живую мышцу на торцевых пластинах двигателя, сначала используйте съемник микропипеток для вытягивания микропипеток из градуированного стекла, оснащенных плунжерами. Далее с помощью препарирующего микроскопа разбейте кончики микропипеток парой щипцов таким образом, чтобы внутренний диаметр каждого просвета составлял примерно 0,5 миллиметра. Затем наполните вытянутые пипетки флюоро-золотом.

Теперь нанесите глазную смазку на животное, находящееся под наркозом, и побрейте конечность, которую нужно сделать инъекцию. С помощью марли протрите выбритый участок тремя чередующимися скрабами хлоргексидина и 70% спирта. Затем положите животное на чистую подкладку, чтобы обеспечить доступ к целевой мышце. Когда животное находится в нужном положении, используйте пару щипцов с зубчатыми захватами, чтобы приподнять кожу над целевой мышцей в сторону от нижележащей мускулатуры, и с помощью хирургических ножниц сделайте разрез на коже.

Позаботьтесь о том, чтобы разрез был достаточно большим, чтобы полностью обнажить интересующую мышцу, с минимальным нарушением работы фасции. Затем, используя фотографии моторной концевой пластины, мысленно перенес расположение и форму интересующей области моторной концевой пластины на мышцу и ввел от 3 до 4 инъекций от 1 до 2 микролитров фтор-золота по всей длине области моторной концевой пластины.

После последней инъекции аккуратно протрите мышцу, чтобы удалить просачивание. Затем с помощью тупых щипцов сблизьте два конца разрезанной кожи. Закройте рану хирургическими зажимами, и проникните во всю пропасть раны соответствующим местным анестетиком.