Адресная доставка миРНК в нейроны для сайленсинга прионных белков с помощью липосомальных комплексов

Начните с небольшой интерферирующей РНК, которая подавляет экспрессию прионного белка, белка, связанного с нейродегенеративными прионными заболеваниями.

Добавьте катионную липосомальную суспензию.

Отрицательно заряженная миРНК связывается с положительно заряженной поверхностью липосомы.

Введите пептид RVG-9r, гликопротеин вируса бешенства, прикрепленный к полиаргининовому хвосту.

Остатки аргинина способствуют связыванию RVG-9r-siRNA.

Введите комплексы липосома-миРНК-пептид в хвостовую вену мыши, находящейся под наркозом.

LSPC циркулируют по кровотоку и достигают мозга.

Пептид RVG-9r связывается с никотиновыми ацетилхолиновыми рецепторами на эндотелиальных клетках, вызывая рецептор-опосредованный трансцитоз через гематоэнцефалический барьер.

Внутри мозга RVG-9r связывается с нейрональными ацетилхолиновыми рецепторами, способствуя эндоцитозу LSPC и высвобождению миРНК.

РНК-индуцированный сайленсинговый комплекс связывается с миРНК.

Пассажирская цепь диссоциирует, в то время как направляющая цепь связывается с мРНК PrP и расщепляется, предотвращая трансляцию и снижая экспрессию PrP.

Добавьте 20 микролитров суспензии липосом 4 наномоль к 200 микролитрам 20 микромольного раствора стоковой миРНК и инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре. Затем добавьте 80 микролитров из 500 микромолярного запаса пептида-нацеливания RVG-9r в раствор липосомы миРНК и инкубируйте в течение 10 минут при комнатной температуре.

После обезболивания мыши с использованием от 2 до 3% изофторана в кислороде накройте глаза мыши офтальмологической мазью и подтвердите обезболивание, выполнив щипывание пальцев ног. Приступайте только в том случае, если реакция отсутствует. Сохраняя анестезию, положите мышь на спину или бок, чтобы получить доступ к хвостовой вене.

Протрите хвост 70% этанолом, а затем с помощью инсулинового шприца 26-го калибра введите 300 микролитров LSPC или PALETS в хвостовую вену. Начните инъекцию дистально и двигайтесь проксимально, если вена лопнула или разорвалась. Поместите мышь в чистую клетку до тех пор, пока она не перестанет лежать на грудине.