Трансплантация клеток-предшественников интернейронов человеческого происхождения в гиппокамп детеныша мыши

Закрепите находящегося под наркозом генетически модифицированного мышиного щенка в стереотаксической рамке, используя противоположные ушные планки, чтобы предотвратить травмы.

В гиппокампе щенка снижены тормозные интернейроны, что приводит к гипервозбуждению возбуждающих нейронов.

Сохраняйте ровное положение головы и накройте щенка льдом, чтобы продлить анестезию.

Продезинфицируйте череп и определите лямбда-шов в качестве точки отсчета.

Расположите инъекционную иглу в целевых координатах гиппокампа.

С помощью изогнутой иглы создайте отверстие для микровхода, минимизировав при этом повреждение черепа.

Опустите иглу на целевую глубину и вводите клетки-предшественники интернейронов, полученные от человека, с контролируемой скоростью, сводя к минимуму повреждение тканей.

Медленно втяните иглу, чтобы предотвратить рефлюкс клеток.

Извлеките щенка из рамки, согрейте его до возобновления движения, затем верните на подстилку в клетку.

Введенные клетки-предшественники рассеиваются по гиппокампу, созревают и интегрируются в нейронную сеть. Со временем они усиливают тормозную передачу, что восстанавливает возбуждающе-тормозной баланс.

Расположите щенка, поместив его на стереотаксическую раму, и используя ушные планки в обратном направлении. Далее очистите поверхность кожи с помощью мягкой ткани, смоченной в этаноле. Определите лямбду и установите координаты равными 0 на цифровом дисплее стереотаксического прибора.

Переместив шприц Гамильтона в нужные координаты, с помощью изогнутой на 90 градусов иглы инсулина проникните в череп, создав крошечное отверстие. Затем опустите шприц Гамильтона вниз до тех пор, пока игла не пересечет череп и не достигнет дорсовентральной координаты.

Опускайте иглу до тех пор, пока не будут достигнуты нужные дорсовентральные координаты. Медленно втяните иглу после введения стволовых клеток. Завершите процедуру, разогрев щенка руками до тех пор, пока он не начнет двигаться, прежде чем отдать его обратно матери.