Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:59 мин. • August 7th, 2025
Заполните микропипетку смесью ДНК, содержащей плазмидные векторы, несущие интересующий ген, и краситель для слежения. Закрепите его в микроманипуляторе.
Поместите агарозный блок под микроскопом и поместите над ним эмбриональный срез мозга мыши со встроенными в агарозу корковыми интернейронами.
Опустите микропипетку и введите смесь ДНК в прогениторную область интернейрона. Отслеживающий краситель отмечает место инъекции.
Поместите еще один агарозный блок на электрод чашки Петри, а агарозный столбик — на защитный электрод.
Перенесите срез на колодку и выровняйте покровный электрод по месту инъекции.
Применяйте короткие электрические импульсы, чтобы временно проникнуть в клеточные мембраны, позволяя плазмидам проникнуть в ядро.
Инкубируйте срез в среде для поддержания жизнеспособности клеток.
Внутри ядра плазмида запускает экспрессию генов, производит целевой белок и модулирует функции предшественников интернейронов.
Для инъекции смешайте экспрессивную и контрольную ДНК вектора в концентрации 1 микрограмм на микролитр для каждого вектора и добавьте раствор быстрого зеленого материала в 1-м разведении от 1 до 10. Наполните стеклянную микропипетку внутренним диаметром 0,5 миллиметра и внешним
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео