Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 2:44 мин. • August 7th, 2025
Начните с ограниченной спинальной и бульбарной мышечной атрофии или мыши, пораженной SBMA.
Очистите его хвост и согрейте его, чтобы расширить вену.
SBMA вызывается мутировавшим андрогенным рецептором или геном AR, который продуцирует мутантную мРНК AR.
Эта мРНК синтезирует токсичные белки в моторных нейронах, которые ухудшают передачу сигналов и приводят к мышечной слабости.
Далее возьмите шприц, содержащий рекомбинантный аденоассоциированный вирус или векторы AAV с плазмидой, кодирующей терапевтическую микроРНК.
Введите иглу в хвостовую вену и введите раствор.
Теперь надавите, чтобы остановить кровотечение, затем верните мышь в клетку.
Попадая в циркуляцию, вирусный вектор достигает двигательных нейронов, которые контролируют функцию мышц.
Вирус проникает в клетку через эндоцитоз, высвобождая плазмиду.
Плазмида продуцирует зрелую микроРНК с комплементарными последовательностями к мутантной мРНК AR.
Эти микроРНК связываются с мРНК AR, вызывая их деградацию.
Это препятствует накоплению токсического белка и способствует улучшению нервно-мышечной функции.
Разделите запас плазмид микроРНК AAV на аликвоты объемом от 100 до 200 микролитров, содержащие вирусную нагрузку от 10 до 100 триллионов геномов на миллилитр. Затем загрузите одну аликвоту в шприц и прикрепите иглу от 27 до 30 калибра.
Теперь, используя стандартный удерживатель для мыши, закрепите мышь с открытым хвостом. Затем очистите хвост от 70% спирта и положите теплую подушечку, под хвост примерно на 30 секунд для увеличения расширения сосудов. Теперь в дистальной части хвоста введите иглу в хвостовую вену скосом вверх и под небольшим углом, примерно на 15 градусов.
Затем введите вирус и подождите несколько секунд, прежде чем извлечь иглу. После извлечения иглы надавите двумя пальцами на умеренное давление, чтобы остановить кровотечение. Затем верните животное в домашнюю клетку.