Шванновские клеточные кондуиты для регенерации аксонов после травмы спинного мозга

Возьмем крысу под наркозом с обнаженными позвонками, с остистыми отростками и пластинками, иссеченными от грудных уровней Т7 до Т9.

Обрежьте спинные и брюшные корни выше и ниже T8.

Нанесите физиологический раствор, чтобы остановить кровотечение, и удалите жидкость с помощью губки.

Пересеките спинной мозг между Т8 и Т9, чтобы разорвать нервные волокна.

Поместите в щель спрессованную пену и нанесите солевой раствор.

Как только кровотечение остановится, удалите пену и удалите остатки жидкости.

Наденьте заранее подготовленный пьезополимерный кабелепровод с открытыми окнами на культю рострального спинного мозга.

Вставьте каудальную культю в противоположный конец кабелепровода.

Введите шванновские клетки, взвешенные в инъекционной матрице, через окна кондуита.

Надежно закройте окна.

Шванновские клетки населяют кондуит и секретируют нейротрофические факторы, которые поддерживают рост аксонов.

Кабелепровод обеспечивает структурное руководство, в то время как его пьезоэлектрические свойства генерируют биоэлектрические сигналы для роста нейритов.

Постепенно аксоны регенерируются по всему мосту, восстанавливая непрерывность между пнями.

Когда все пластинки будут удалены, убедитесь, что видны промежутки между поперечными отростками, особенно в точке Т8, и осмотрите кости по обеим сторонам между Т7 и Т9, чтобы подтвердить, что наружу нет выступающих наружу костных фрагментов, а спинные корни должны стать видимыми. С помощью наклонных пружинных ножниц обрежьте спинные и брюшные корни выше и ниже T8. И добавьте в спинной мозг физиологический раствор, чтобы помочь остановить кровотечение.

Далее поместите наклонные пружинные ножницы над спинным мозгом в промежутки между поперечными отростками в точке Т8, и сделайте один надрез, чтобы полностью разорвать нервную ткань. Поместите небольшой кусочек спрессованной пены в образовавшийся зазор от 2 до 2,5 миллиметров, и сразу же добавьте в область физиологический раствор.

Ожидая, пока оторванные обрубки пуповины достигнут гемостаза, разрежьте абсорбционные треугольники на тонкие длинные кусочки и извлеките кабелепровод из хранилища PBS. Поместите несколько треугольников в кабелепровод, чтобы удалить излишки PBS, и убедитесь, что предварительно вырезанные окна открыты.

Затем удалите среду из гранулы шванновской клетки GFP и повторно суспендируйте шванновские клетки в 10 микролитрах холодного DMEM/F-12. Добавьте в клеточную суспензию 10 микролитров холодного инъекционного геля и хорошо перемешайте с повторным пипетированием. Затем поместите клеточную суспензию на лед. Когда культи пуповины будут готовы, удалите спрессованную пену, а затем с помощью длинных кусочков абсорбционных треугольников удалите физиологический раствор и кровь из области ламинэктомии.

Затем с помощью микрошпателя аккуратно приподнимите ростральный пень и наденьте трубу на пень окнами вверх. Заботьтесь о том, чтобы была вставлена вся культя и чтобы не было избыточного кровотечения в канале. Осторожно поднимите каудальную культю и наденьте на нее другой конец кабелепровода. Заботясь о том, чтобы вставлен весь пень и чтобы окна находились на спинной поверхности.

Затем с помощью микропипетки, оснащенной наконечником для загрузки вестерн-блоттинга, введите 20 микролитров смеси инъекционной матрицы GFP Schwann cell в канал через одно из предварительно вырезанных окон. И закрыть окна.