JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 2:11 мин • August 7th, 2025
Начните с трубки, содержащей суспензию экзосом, которые представляют собой внеклеточные нановезикулы на основе липидов.
Добавьте в пробирку фосфатно-солевой буфер или PBS для получения равномерной дисперсии экзосом.
Отсадите раствор экзосомы и отфильтруйте его с помощью мембранного фильтра для удаления остаточных загрязнений.
Переложите эту отфильтрованную суспензию экзосом в свежую пробирку.
Добавьте в суспензию экзосом раствор, содержащий нейротерапевтическое средство допамин, а затем сапонин, сурфактант.
Инкубируйте смесь при физиологической температуре для повышения проницаемости экзосомальной мембраны.
Сапонин избирательно удаляет мембраносвязанные холестерины с мембранной мембраны, создавая поры в экзосомальных липидных бислоях.
Дофамин диффундирует через эти поры в экзосомы.
Со временем липиды в экзосомальной мембране перераспределяются, и поры закрываются, инкапсулируя дофамин в экзосомах.
Далее ультрацентрифугированием раствора смеси для гранулирования экзосом, загруженных дофамином.
Удалите надосадочную жидкость, содержащую свободный дофамин и сапонин.
Гранула, содержащая экзосомы, загруженные допамином, готова к дальнейшим исследованиям.
В экзосомную суспензию, собранную ранее ультрацентрифугированием, добавить 3 миллилитра PBS, а разбавленную суспензию стерилизовать фильтрацией с помощью фильтра 0,22 мкм.
Затем переложите 500 микролитров стерилизованной суспензии экзосом в другую пробирку.
Далее последовательно добавьте в стерилизованную суспензию 500 микролитров 0,5 миллиграмм на миллилитр раствора дофамина и сапонина. После инкубации провести ультрацентрифугирование суспензии.