JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 3:18 мин • August 7th, 2025
Возьмем, к примеру, мышь под наркозом, которую кормили пищей, содержащей ингибиторы.
В тканях мозга этот ингибитор избирательно устраняет клетки микроглии.
Нанесите раствор гиалуронидазы на обе ноздри.
Ненадолго поместите мышь в положение лежа на спине, чтобы предотвратить стекание раствора.
Гиалуронидаза разрушает внеклеточный матрикс слизистой оболочки носа, разрыхляя клетки и усиливая проникновение в ткани.
Введите индуцированную плюрипотентную микроглию человека, полученную из стволовых клеток, или суспензию клеток iPSMG в одну ноздрю.
Поместите мышь в положение лежа на спине. Затем введите суспензию в другую ноздрю.
Повторите прием несколько раз.
Клетки iPSMG проникают через слизистую оболочку носа и следуют по обонятельному пути, чтобы достичь мозга, тем самым обходя гематоэнцефалический барьер.
Дайте мыши восстановиться.
Обезболивайте мышь и вводите трансплантационную среду интраназально через равные промежутки времени.
Факторы роста в среде поддерживают рост и выживание трансплантированных iPSMG клеток в мозге мыши.
Чтобы подготовить мышей к трансназальной трансплантации, кормите самцов мышей диетой, содержащей PLX, в течение семи дней. В конце седьмого дня захватите рацион PLX и кормите мышей обычным рационом. За час до трансназальной трансплантации iPSMG введите 2,5 микролитра гиалуронидазы в PBS в каждую ноздрю дважды, используя наконечник пипетки объемом 10 микролитров, чтобы увеличить проницаемость для слизистой оболочки носа.
Поместите мышей в положение лежа на спине после применения гиалуронидазы. Введите 2,5 микролитра гиалуронидазы за 10 минут до трансназальной трансплантации iPSMG. Нанесите 2,5 микролитра клеточной суспензии в одну ноздрю мыши с помощью наконечника пипетки объемом 10 микролитров. Поместите мышь в положение лежа на спине на пять минут перед введением клеточной суспензии в другую ноздрю.
Ввести клеточную суспензию четыре раза, применяя общий объем 20 мкл на животное. Через 48 ч после прекращения кормления PLX повторить введение гиалуронидазы и клеточной суспензии на тех же мышах. Для введения цитокинов необходимо ввести 2,5 микролитра трансплантатной среды в одну ноздрю мыши с помощью наконечника пипетки объемом 10 микролитров.