JoVE Encyclopedia of Experiments
Нейронауки
0 просмотров • 2:47 мин • August 7th, 2025
Начните с крысы, которой хирургическим путем имплантировали оптические волокна, нацеленные на синапсы между нейронами медиального коленчатого ядра (MGN) и латеральной миндалины (LA).
Крысу приучают нажимать на рычаг для приема наркотика через катетер, что связано со слуховыми и визуальными сигналами.
Во время повторного обусловливания слуховые сигналы проходят через MGN и вызывают повышенную регуляцию рецепторов нейротрансмиттеров в синапсах, укрепляя синаптические связи.
Вирусно трансдуцированная крыса экспрессирует светочувствительные ионные каналы в нейронах MGN.
Подавайте низкочастотные импульсы через оптические волокна для открытия этих каналов, процесс, называемый оптогенетической стимуляцией.
Возникающий в результате приток катионов индуцирует высвобождение низкочастотных нейротрансмиттеров.
Нейротрансмиттеры связываются с рецепторами на нейронах LA и индуцируют приток кальция в низком уровне, что индуцирует интернализацию рецепторов нейротрансмиттеров и ослабляет синапсы.
Ослабленная синаптическая передача MGN-LA приводит к снижению нейронной коммуникации, известной как долгосрочная депрессия (LTD), и снижает связанное с сигналами поведение по поиску наркотиков.
Для оптогенетической индукции длительной депрессии или LTD подключите патч-кабели к синему лазерному диоду с яркостью 473 нанометра через вращающееся соединение, подвешенное над чистой стандартной клеткой для содержания грызунов. Включите лазер согласно инструкции по эксплуатации и подключите лазер к генератору импульсов. Отрегулируйте настройки, чтобы дать крысе 900 импульсов света с частотой 2 микросекунды и частотой 1 Гц. Измерьте светоотдачу через патч-корд с помощью датчика освещенности и отрегулируйте интенсивность лазера так, чтобы светоотдача через патч-кабель составляла примерно от 5 до 7 мВт.
Поместите крысу в чистую клетку и снимите пылезащитные чехлы и втулки с наконечниками, обнажив наконечники. Затем подсоедините патч-корды двусторонне к каждому наконечнику. При правильной настройке грызуны смогут свободно передвигаться по клетке во время оптогенетической стимуляции. Дав крысе возможность исследовать окружающую среду в течение трех минут, включите генератор импульсов, чтобы инициировать оптогенетическую стимуляцию. После длительной индукции депрессии дайте крысе остаться в клетке в течение трех минут, прежде чем поместить ее обратно в домашнюю клетку.