Индуцирование повреждения малоберцового нерва у мышей для изучения регенерации нервно-мышечного перехода

Поместите мышь под наркозом с бритой задней лапкой под хирургический микроскоп.

Надрежьте кожу на бритой ноге, затем разрежьте слои соединительной ткани, чтобы обнажить нижележащие мышцы.

С помощью ретракторов разделите мышцы, чтобы обнажить общий малоберцовый нерв.

Нерв содержит моторные нейроны, окончания аксонов которых соединяются с мышечными волокнами, образуя нервно-мышечные соединения или NMJ.

Найдите место пересечения нерва с сухожилием икроножной мышцы в колене.

Удерживайте нерв щипцами и надавливайте, чтобы вызвать травму.

Полупрозрачное место повреждения указывает на повреждение аксонов, что приводит к нарушению NMJ.

Убедитесь, что внешний слой эпиневрия нерва не поврежден, чтобы управлять регенерацией аксонов.

Удалите ретракторы и выровняйте мышцы. Зашить место разреза и дать мышке восстановиться.

Сигналы от поврежденных аксонов рекрутируют макрофаги для очистки аксонального мусора, что поддерживает регенерацию аксонов и восстановление NMJ.

Поместите мышь на операционную доску и подтвердите отсутствие реакции на защемление пальца ноги. Выровняйте конечности в пределах фиксаторов, при этом целевая задняя конечность находится в анатомически естественном положении, а коленный сустав слегка вытянут без внутреннего или внешнего вращения.

Затем перенесите животное под хирургический микроскоп. И регулируйте доску до тех пор, пока костлявый коленный сустав и гребень между передней большеберцовой мышцей и икроножной мышцей не будут видны через объектив. С помощью скальпеля и щипцов сделайте примерно трехсантиметровый разрез через кожу перпендикулярно основному руслу общего малоберцового нерва. Продолжайте разрез через поверхностную фасцию, обнажая двуглавую мышцу бедра и латеральные мышцы, а затем сделайте разрез от 1 до 2 сантиметров через соединительную глубокую фасцию для разделения мышц.

Затем с помощью механических ретракторов отступите каудально двуглавой мышцы бедра, чтобы выявить общий малоберцовый нерв. Проведите нерв проксимально до тех пор, пока не будет найдено его пересечение с сухожилием латеральной головки икроножной мышцы. Затем с помощью тонких щипцов захватите нерв, выровняв кончики параллельно латеральной границе сухожилия икроножной мышцы. И приложите постоянное концентрированное давление в течение 5 секунд, чтобы раздавить общий малоберцовый нерв.

Держа щипцы перпендикулярно волокну, обхватите ткань областью сразу за кончиком щипцов. И надавите сильно, но мягко для чистого, линейного раздавливания нерва вдоль границы сухожилия.

Визуально осмотрите нерв через операционный микроскоп, чтобы подтвердить полное раздавливание ткани. Нерв будет казаться полупрозрачным в месте травмы. Если нерв был достаточно поврежден, удалите ретракторы. И выровнять мышцы в их анатомическом положении. Затем с помощью шелковых швов 6-0 закрыть место разреза одним-тремя простыми, прерывистыми швами и поместить мышь на грелку в чистую клетку с контролем до полного восстановления.