Внутривенное введение рекомбинантных аденоассоциированных вирусных векторов на модели крысы

Начните с крысы под наркозом, лежащей на боку с обнаженным хвостом.

Найдите боковую хвостовую вену, определите место инъекции по всей ее длине и продезинфицируйте область.

Слегка надавите над местом инъекции, чтобы расширить вену.

Возьмите шприц, содержащий рекомбинантный аденоассоциированный вирус или вектор AAV, несущий целевой ген.

Совместите иглу с жилой и проткните кожу хвоста.

Ослабьте давление на вену, чтобы восстановить нормальный кровоток.

Введите иглу в хвостовую вену и медленно введите вирус.

После инъекции извлеките иглу, надавите, чтобы остановить кровотечение, и следите за выздоровлением крысы.

Боковая хвостовая вена доставляет вирус в кровоток, где он циркулирует по сердцу и попадает в мозг, достигая нейронов.

Внутри нейрона вирус проникает в ядро, высвобождает свой генетический материал и способствует производству белков-мишеней для нейротерапевтического применения.

Правильно обезболить крысу можно с помощью наркозной системы. Обеспечить адекватную плоскость анестезии за счет отсутствия реакции на защемление пальца ноги. Затем поместите крысу в рабочую зону на бок и поддерживайте анестезию с помощью носового конуса. Когда крыса лежит на боку, одна боковая хвостовая жилка должна быть обращена вверх.

Место инъекции находится на две трети длины хвоста. Протрите место инъекции спиртовой салфеткой. Крепко держите хвост немного выше области инъекции одним пальцем прямо над боковой хвостовой веной. Это расширит вену. Скосом вверх совместите иглу с видимой хвостовой веной в том же направлении.

Прокалывайте кожу над хвостовой веной, соблюдая при этом большую осторожность, чтобы другая рука не держала хвост и не надавливала на хвостовую вену. Ослабьте давление на хвостовую вену, чтобы обеспечить нормальный кровоток. Затем введите иглу в вену. Чтобы убедиться, что игла проколола хвостовую вену, слегка оттяните поршень назад. Если игла находится в вене, кровь будет поступать в иглу.

После изменения положения иглы, при необходимости, стабилизируйте иглу, прижав конец шприца к хвосту. Медленно вводите вектор в хвост со скоростью примерно 20 микролитров в секунду.

В случае плохой инъекции животное будет трансдуцировано лишь частично, и результаты, вероятно, не будут полезными. Однако, с практикой, хорошие инъекции очень воспроизводимы и надежны.

Если вектор был введен, удалите иглу из хвоста и прижмите марлевую салфетку к месту инъекции, чтобы остановить кровотечение на 30–60 секунд. Выключите изофлурановую анестезию и кислород. Наблюдайте за крысой, пока она не придет в сознание, а затем верните ее в клетку. Выбросьте материалы, которые могут быть загрязнены AAV, в соответствующий контейнер для биологически опасных веществ, а рабочую станцию очистите 70% этанолом.