Воспроизводимые мыши седалищного нерва и Давка Последующие оценки регенерации полного анализа горы мышц

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы продемонстрировать простой воспроизводимый метод сдавливания седалищного нерва и анализ всей системы реиннервации мышц после сдавливания седалищного нерва. Это достигается путем предварительного обнажения седалищного нерва, включая правильное расположение хирургических ретракторов для обеспечения хорошего доступа к нерву. Далее раздавите нерв щипцами для кровоостанавливания и отметьте нерв древесным углем.

Затем удалите отдельные мышцы, иннервируемые седалищным нервом, с задней конечности. Заключительным этапом является препарирование отдельных мышц для анализа всего маунта после иммуноокрашивания. В конечном счете, результаты демонстрируют, что воспроизводимое разрушение седалищного нерва может быть просто выполнено, а мышечные отверстия могут быть использованы для анализа последующей регенерации.

Основное преимущество этой процедуры заключается в том, что она обеспечивает простую воспроизводимую технику раздавливания седалищного нерва и последующей регенерации аксонов. Начните эту процедуру с обезболивания мыши перед операцией с использованием коктейля из 100 миллиграммов на килограмм кетамина и 10 миллиграммов на килограмм ксилазина через внутрибрюшинную инъекцию, чтобы свести к минимуму послеоперационную боль. Мышь также получает подкожную инъекцию в количестве 10 миллиграммов на килограмм мелоксикама.

Далее аккуратно побрейте обе задние конечности с помощью хирургической машинки для стрижки. Затем нанесите крем для удаления волос с волос для полного истощения. Очистите кожу стерильным аппликатором с ватным наконечником и хирургическим скрабом Бетадином.

После этого нанесите офтальмологическую мазь на глаза с помощью стерильного аппликатора с ватным наконечником. Поместите мышь на чистую тарелку из нержавеющей стали поверх предварительно нагретого одеяла и поддерживайте температуру животного на уровне 37 градусов по Цельсию. Затем заклейте все конечности скотчем.

Осторожно расположите заднюю конечность симметрично так, чтобы коленный сустав делал прямой угол с телом. Впоследствии накройте операционное поле стерильной простыней под микроскопом. Сделайте полукруглый разрез по средней линии.

Аккуратно отделите кожу от основной мускулатуры и время от времени сворачивайте ее. Нанесите около 0,1 миллилитра стерильного физиологического раствора, чтобы сохранить место операции влажным во время процедуры. Далее откройте фасциальную плоскость между большой ягодичной мышцей и передней головкой двуглавой мышцы бедра.

Выявить седалищный нерв для хирургического контроля. Контралатеральный седалищный нерв должен быть оголен и мобилизован, но оставлен нетронутым. Затем отдохните и зашите ягодичную мускулатуру.

Обнажайте экспериментальный седалищный нерв таким же образом, как и ретракторы. Для облегчения визуализации. Аккуратно освободите седалищный нерв от окружающей соединительной ткани с помощью ножниц для иридэктомии.

Затем с помощью тонких щипцов 5:45 поместите нерв на нижнюю челюсть сверхтонких гемостатических щипцов, выровняйте три фасциальные вместе, а не друг над другом. На гемостатических щипцах выгравирована метка на расстоянии 1,5 миллиметра от их кончика. Поместите самую внешнюю часть седалищного нерва на одну линию с этой отметкой перед раздавливанием.

Это обеспечивает сдавливание равномерной ширины и то, что нерв не выходит за пределы челюстей гемостатических щипцов при сплющивании из-за сжимающей силы. Если нерв выходит за пределы кончиков щипцов, нерв будет раздавлен лишь частично. Используйте вторую пару гемостатических щипцов, предварительно смоченных и измельченных в порошок углем, чтобы отметить место раздавливания.

Раздавите нерв в том же месте раздавливания в течение 15 секунд в три клика. Никакая углеродная маркировка не должна выходить за границу первоначального дробления. Это особенно важно, если требуется точная маркировка места раздавливания для предварительного погружения щипцов в уголь и предотвращения широкого распространения углерода в месте операции.

Откройте щипцы в порошкообразном угле. Затем аккуратно закройте их. Используйте стерильную марлю, чтобы вытереть нагар с внешней стороны гемостатиков.

Проверьте щипцы при увеличении не менее трех раз, чтобы убедиться, что дробящие поверхности равномерно покрыты порошкообразным углеродом. При необходимости их повторно окунают и протирают для отдыха и зашивают ягодичную мускулатуру так же, как и контралатеральную сторону. Наконец, закройте разрез кожи с помощью девятимиллиметровых рефлекторных зажимов.

Если обнаружено, что девятимиллиметровые рефлекторные зажимы ограничивают движение, можно использовать меньшие рефлекторные зажимы или шесть вспомогательных швов. Вместо этого, пожертвовав мышью, удалите четыре мышцы. Передние большеберцовые кости exterory digitorum longus, peroneus longus и камбаловидную мышцу в задней конечности осторожно прикалывают через их соединительные ткани к блюду, покрытому черной сардой.

Затем промойте их в PBS. Впоследствии зафиксируйте их в 4%-ном параформном альдегиде на 30 минут. Чтобы рассечь каждую мышцу на чашке Петри, покрытой черной сардой, удалите из нее сухожилия с помощью иридэктомических ножниц.

После этого разожгите мышцы, отслаивая внутренние мышечные волокна Тщательно сохраните внешнюю поверхность мышцы, включая полосы торцевой пластины. Затем закрепите полученные мышцы на плюсовых горках с векторным щитком и стеклянной крышкой 22 на 40 миллиметров, запечатайте две стороны прозрачным лаком для ногтей. Когда они правильно установлены на затворе, ленты пластины должны соприкасаться с защитными накладками.

Вот пример места раздавливания in situ на левой задней конечности. Место раздавливания обозначается черным углеродом. Звездочкой отмечена ветвь большеберцового нерва, которая иннервирует мускулатуру бедра и служит полезным ориентиром.

Во время операции по раздавливанию большеберцовый отдел седалищного нерва обведен синим, малоберцовым и зеленым, а срель и желтым. Этот полутонкий срез демонстрирует полное раздавливание, выполненное с помощью гемостатических щипцов. Стрелки указывают здесь на измельченные волокна.

Неполное раздавливание, выполненное угловыми щипцами, указано на другом участке полуребра. Стрелка снова указывает на измельченные волокна, в то время как стрелки указывают на сохранившиеся аксоны. Это визуализированные изображения со всех мышц монта.

После удаления соединительной ткани и последующего истончения на каждой мышце намечаются полосы nplate. Здесь показана су-цельная мускулатура. Через 14 дней после раздавливания седалищного нерва.

Стрелками обозначены участки нервно-мышечного соединения, которые были реиннервированы аксоном. Вот демонстрация денервированного нервно-мышечного соединения. Щель 43 положительных процессов клеток Шван обозначена стрелками.

В этом денервированном нервно-мышечном соединении не видно аксонов. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как воспроизводимо подавлять статический нерв и готовить мышечные гормональные массивы к анализу регенерации.