Chromosomics: Определение численного и структурные изменения во всех 24 хромосом человека одновременно, используя Роман OctoChrome Анализ FISH

Анализ Octa Chrome Fish одновременно исследует все 24 человеческие хромосомы в одной гибридизации на одном предметном стекле. Во-первых, подготовьте метафазные расклады на конкретном восьмиугольном слайде. Затем выполните автоматическое сканирование предметного стекла образца, чтобы облегчить определение местоположения всех метафаз и последующую повторную оценку всех изображений клеток.

В следующем положении восемь квадратов скользят по устройству Octa chrome и гибридизуют щупы. Полученные результаты могут показать три различные окрашенные цельные хромосомы в каждом квадрате на основе расположения комбинаций хромосом на устройстве обратного осмоса. Впервые идея этого метода RO FISH пришла мне в голову, когда я начал применять рыб в исследованиях человеческой популяции в начале 1990-х годов.

Затем я представил свою идею тройной цветной живописи, восьмиугольной горки для установки ячейки на ежегодной конференции A A CR в 1994 году. Основное преимущество этой методики перед существующими методами, такими как классическое изгибание хромосом и современное спектральное прототипирование, заключается в том, что она может легко анализировать все 24 хромосомы человека в большем количестве клеток. Начните с подготовки метафазных клеток, закрепленных в суспензии в виде контрольной пипетки, капните клетки на предметное стекло и проверьте соответствующую плотность.

Теперь окуните в восемь квадратных OC хрома, опустите в чистый этанол на две минуты. В последовательности чередующихся квадратов распределите пять микролитров клеточной суспензии на предметное стекло шаблона, чтобы предотвратить вмешательство клеточных разбросов друг в друга. Высушите образцы на воздухе перед обнаружением соседних пар.

Нанесите 20 микролитров 0,2 микрограмма на миллилитр морилки DAPI на центр каждой половины предметного стекла и поместите защитный лист. Теперь выполните автоматическое сканирование предметного стекла образца, чтобы локализовать метафазные ячейки. Используйте программное обеспечение метавселенной, чтобы облегчить определение местоположения всех метафаз и последующую переоценку всех изображений клеток.

Просматривайте результаты сканирования вручную и удаляйте неметафазные артефакты. Сначала удалите пятно DPI в двух буферах XSSC, затем обезвожьте образцы с помощью серии промывок этанолом. Высушите предметное стекло на воздухе, а затем поместите его на хмелевую пластину с температурой 37 градусов Цельсия на пять минут.

Теперь уравновесьте цветной зонд, многозондовую гибридизационную камеру и буфер для гибридизации в водяной бане при температуре 37 градусов Цельсия этикеткой вниз. Поместите хромированное устройство OC на конфорку с температурой 37 градусов Цельсия. Добавьте по два микролитра предварительного раствора для гибридизации на каждую из восьми областей.

Аккуратно переверните и сориентируйте шаблон. Проведите пальцем по хромированному устройству OC. Убедитесь, что слайд шаблона выровнен по устройству Octa Chrome.

Затем осторожно опустите предметное стекло на капли гибридизационного раствора и приложите мягкое равномерное давление, чтобы распределить гибридизационный раствор по краям каждого из выступающих участков на хромированном устройстве OC. Поднимите матовый конец стеклянного предметного стекла и переверните его так, чтобы предметное стекло оказалось под хромированным устройством OC. Поместите на горячую плиту с температурой 37 градусов Цельсия на 10 минут.

Затем переложите его на горячую плиту с температурой 75 градусов Цельсия на пять минут. Для денатурации образцов для этапа гибридизации переносят в хромазонд, многозондовую камеру гибридизации. Установите крышку на место и поставьте камеру на водяную баню при температуре 37 градусов Цельсия на ночь.

Осторожно снимите предметное стекло с прибора и промойте в 0,4 излишках SC при температуре 72 градуса Цельсия в течение двух минут. Выполните вторую стирку при комнатной температуре в течение 30 секунд. Добавьте 20 микролитров DPI в центр каждой половины предметного стекла и установите защитный лист.

Инкубируйте образцы в темноте в течение 10 минут при комнатной температуре перед просмотром с помощью флуоресцентной микроскопии. Анализ Octa-хромовой рыбы позволяет одновременно исследовать все 24 хромосомы человека с использованием одной гибридизации на одном предметном стекле. Каждый квадрат содержит три различных полнохромосомных зонда для окрашивания, непосредственно помеченных флюором разного цвета.

Четырехкратное исследование нормальной метафазной клетки во втором квадрате системы Octa CHRO показывает, что хромосомы 8, 21 и 12 окрашены в красный, зеленый и синий цвета. Они могут быть визуализированы по отдельности с помощью соответствующих фильтров или одновременно визуализированы с помощью тройного фильтра DAPI Fitzy, Texas Red. Этот хромосомный подход полезен для обнаружения аномальных клеток со специфическими для лейкемии хромосомами, транслокацией и анеуплоидией.

Например, T 8 21 является распространенным хромосомным транслокацией при остром миелоидном лейкозе. Трисомия 21 3 копии хромосомы 21 является распространенной анеуплоидией при лейкозе После развития. Этот метод проложил путь ученым в области молекулярной цитогенетики и молекулярной эпидемиологии к изучению наиболее распространенных хромосомных перестроек, обнаруженных при лейкемии и лимфоме, а также к изучению селективной плоидности среди всех хромосом человека у клинических пациентов или популяций, подвергшихся воздействию токсичных химических веществ.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как одновременно исследовать все 24 хромосомы человека в одной гибридизации на одном предметном стекле с помощью анализа Octo Chrome Fish. И мы определяем это как хромосомы.