Методы Анализ Drosophila Поведение

Общая цель этой процедуры — продемонстрировать методы исследования моторного, сенсорного и координационного поведения дрозофил. Это достигается путем предварительной оценки моторной функции лавы, анализа ползучести, оценки моторной функции взрослого человека, кольцевого анализа и оценки координации и сенсорных способностей взрослого человека с помощью анализа ухаживания. В конечном счете, эта панель поведенческих анализов может показать, как генетические и внешние факторы, такие как медикаментозное лечение, могут влиять на активность и координацию.

Intra sophala. Основное преимущество этого анализа перед существующими методами, такими как отрицательная геоось, заключается в том, что кольцевой анализ имеет более высокую пропускную способность и более чувствителен. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области нейродегенеративных заболеваний, такие как выявление дефектов опорно-двигательного аппарата на ранней стадии.

Демонстрировать этот анализ будет доктор Джейми Бекнелл, постдок моей лаборатории. Тест на ползание личинок используется для измерения влияния генетических факторов и факторов окружающей среды на подвижность, чтобы начать скрещивание от 10 до 15 самцов и от 10 до 15 девственниц в стандартной бутылке. Через 24 часа здоровые взрослые особи отложат достаточно яиц, чтобы заполнить бутылку, чтобы сохранить возраст популяции до 24 часов.

Перелейте взрослые в свежую бутылку и повторите процесс. Теперь инкубируйте бутылочку до тех пор, пока в пище к бутылочке не будут наблюдаться третьи в звездчатых личинках. Добавьте от 50 до 100 миллилитров 20% сахарозы и оставьте на 20 минут.

Личинки всплывут наверх, соберут личинок с помощью серологической пипетки объемом 25 миллилитров с отрезанным кончиком и уложат в сетчатую корзину. Промойте личинки в сетчатой корзине дважды деионизированной водой. Теперь над ними можно экспериментировать.

Чтобы обработать личинок лекарственным препаратом, с помощью щетки нужно транспортировать нужное количество личинок в пятимиллилитровый стакан, содержащий раствор 5% сахарозы и интересующий препарат. Дайте им питаться раствором сахара в течение 15 минут, затем вылейте их обратно через сетчатую корзину, промойте и продолжайте измерять влияние препарата на моторику. С помощью щетки перенесите отдельную лаву в 15-сантиметровую чашку Петри, содержащую 2%арос.

Установите поверх листа графтовой бумаги. Теперь соберем данные. Просто посчитайте количество линий сетки, которые лава пересекает за одну минуту.

Затем с помощью щетки перенесите лаву в отверстие стеклянной чашки для вскрытия, содержащей разбавленный раствор дрожжевой пасты, под микроскопом для вскрытия в течение одной минуты, подсчитайте сокращения Перси. Однократное сокращение считается полным задним по отношению к переднему движению. Повторяйте до тех пор, пока не будет подсчитано нужное количество личинок.

Кольцевой протокол измеряет скорость движения взрослых животных, собирает вновь появившихся взрослых самцов мух под легким наркозом и переводит их в стандартную папку, содержащую обычную или медикаментозную пищу. Положите примерно 25 мух во флакон. Поддерживайте мух при комнатной температуре в течение двух-трех дней для полного восстановления под наркозом и накопления стабильного уровня препарата.

Затем переложите около 25 мух без анестезии в полистирольные флаконы с формованными пробками, и соберите флаконы в один или несколько кольцевых аппаратов. Дайте мухам отдохнуть от 15 до 20 минут, одновременно настраивая цифровую камеру, чтобы сфотографировать флаконы сбоку, подготовьте таймер и установите его на желаемую продолжительность анализа. Обычно на проведение анализа отводится три секунды.

Держите кольцевой аппарат в одной руке, не беспокоя мух, а в другой руке резко держите таймер камеры. Трижды постучите по аппарату на скамейке, чтобы сбить мух и одновременно запустить таймер обратного отсчета камеры. Повторяйте эссе раз в минуту, пока не будет выполнено пять или шесть попыток.

Крайне важно не использовать повторно тестовые флаконы из полистирола после того, как были собраны первоначальные наборы данных. Потому что новые мухи, помещенные в использованные флаконы, не будут подниматься так же сильно, как мухи, помещенные в свежие флаконы. Чтобы собрать данные с помощью просмотрщика изображений, оцените среднюю высоту, поднимитесь по разным группам.

Этот анализ требует подготовленных генетических скрещиваний в бутылках, которые производят обильное потомство для сбора мух для анализа. В течение пары часов после того, как животное станет субъективным, уберите бутылки, чтобы собрать всех взрослых особей с интервалом в три-четыре часа. Соберите вновь появившихся сексуально наивных самцов и самок, разместите самцов по отдельности во флаконах или пробирках с пищей, разместите самок в группах по пять-шесть человек.

В подобных вольерах для проведения анализа требуется равное количество самцов и самок. После изоляции собранных мух в течение пяти дней приготовьтесь погрузить их в сопрягаемое колесо и провести пробу. Далее аккуратно перенесите одну самку и одного самца в камеру сопрягаемого колеса под микроскопом вскрытия.

Наблюдайте за парой в течение 10 минут или до тех пор, пока они не начнут успешно совокупляться в течение этого времени. Записывайте, когда каждое из нескольких поведений наблюдается впервые. Записывайте, когда самец впервые поворачивается в сторону самки.

Когда самец впервые касается самки своей пластинкой ноги, когда самец впервые вытягивает и вибрирует пластинкой крыла, когда самец впервые облизывает запись гениталий самки, когда самец впервые сворачивает брюшко под себя. Запишите, когда мужчина впервые пытается установить женский адрес электронной почты. Наконец, запишите общее время, затраченное на ухаживание до тех пор, пока не произойдет совокупление.

Для животных дикого типа это почти всегда в течение пяти-10 минут, собирают данные по трем разным параметрам. Во-первых, задержка поведения — это время, которое требуется до того, как оно будет впервые замечено. Во-вторых, частота поведения зависит от того, наблюдается оно или нет.

И в-третьих, индекс ухаживания — это время, затраченное на ухаживание, разделенное на общее время и до совокупления в эксперименте с животными. Мутации в F-U-S-T-L-S связаны с боковым миотрофическим склерозом. Генные мутанты с центром вставки показали вдвое меньшую способность к ползанию по сравнению с контрольной группой дикого типа, а миссенс-мутация R 5 21 C снизила скорость ползания до всего лишь одного сантиметра в минуту.

Кольцевое тестирование молодых взрослых мух дикого типа привело к средней высоте, поднявшейся от трех до пяти сантиметров за три секунды. В этом анализе не наблюдалось десенсибилизации, так как до пяти последовательных попыток с интервалом в одну минуту во время попытки проведения кольцевого анализа не наблюдалось. Важно помнить, что нужно быть как можно более точным в отношении времени.

После освоения эссе о скученности личинок можно провести за 30-40 минут, чтобы наблюдать за 10 испытаниями для одного генотипа, если оно выполнено правильно. После просмотра этого видео вы также должны хорошо понимать, как наблюдать и оценивать брачное поведение у мухи.