Быстрое Точка-санитарной помощи анализа эффективности эноксапарина антикоагулянтов в цельной крови

Демонстрация быстрого количественного анализа ингибирования свертывания крови по низким молекулярным весом гепарин, эноксапарин. Вклад эноксапарина оценивается путем удаления своего влияния за счет расщепления гепариназой. Более подробное описание анализа подробно описана в нашем опубликованной работе.

В качестве введения мы обратимся к опубликованной работе о временном течении уровней низкомолекулярного гепарина эноксапарина в плазме крови у человека. Сегодня мы демонстрируем наши результаты с помощью экспресс-анализа на низкомолекулярный гепарин. В данном случае субъектом является Эноксапарин.

Результаты, показанные на этом слайде, показывают концентрацию в плазме крови у пациентов, которые получали препарат хронически один раз в день, 40 мг в день, и временные затраты на это последнее введение, за которым последовало дальнейшее исчезновение, позволяют видеть, что примерно через четыре часа после введения достигается пиковая концентрация 0,4 международных единиц на мл. И этот уровень находится в пределах терапевтического диапазона препарата. Однако особый интерес также представляет то, сколько остается через 12 часов после введения, потому что существует клинически принятое руководство, согласно которому следует подождать, по крайней мере, 12 часов после введения низкомолекулярного гепарина, в данном случае эноксапарина, прежде чем проводить какую-либо особенно инвазивную процедуру, которая может привести к риску кровотечения. Для нас представляет интерес тот факт, что в то время все еще существовало четко определяемое количество, и мы сосредоточились на этом в некоторых наших исследованиях, которые мы продемонстрируем.

Также в этой работе Sender in etal представлен тот факт, что люди с почечной недостаточностью имеют значительно более высокие уровни препарата на протяжении всего периода времени, и мы видим, что 12-часовая рекомендация может быть очень неадекватной в случае пациента с почечной недостаточностью или, как известно, у беременной женщины или у пациентов с ожирением. Я хотел бы представить исследователей, которые были вовлечены в этот проект в Нью-Йоркском медицинском колледже. Меня зовут Марио Оса.

Я здесь профессор фармакологии. Я доктор Сурья Патула, доцент кафедры клинической анестезиологии Нью-Йоркского медицинского колледжа. Меня зовут Кешар Кал.

Я студентка третьего курса медицинского факультета. Это аппарат, который мы используем для проведения этих анализов. Аппарат производится корпорацией «Омикрон».

Его можно использовать как от сети, так и от батареек, и поэтому в этом смысле он действительно является местом оказания медицинской помощи. Аппарат имеет два терморегулируемых отсека, и мы используем эти отсеки для предварительной инкубации образцов при подготовке к фактическому анализу, а также для самого анализа коагуляции. Основной особенностью анализа является использование высокоочищенного, коммерчески доступного препарата гепариназы.

Мы купили его у корпорации «Сименс». Он выпускается в очень стабильной форме и легко растворяется в физрастворе или любом водном растворе. Использование гепарина АПФ особенно ценно в нашем подходе, поскольку оно позволяет нам получить исходное значение коагуляции пациента.

При отсутствии какого-либо влияния гепарина, гепарина, АПФ способен полностью расщеплять низкомолекулярный гепарин и нефракционированный гепарин, но наш особый интерес здесь представляет низкомолекулярный гепарин и деградировать до бездействия и давать значение времени свертывания при отсутствии какого-либо влияния гепарина. То, что мы здесь иллюстрируем, является временным ходом деградации низкомолекулярного гепарина, в данном случае эноксапарина, гепариназой. Данные представлены в процентах от исходного времени резки, поэтому здесь мы видим, что Эноксапарин добавлен в соотношении 1 против 10.

Международные единицы на мл приводят к увеличению времени свертывания крови примерно на 50%. Затем, после различных периодов инкубации с гепариназой при температуре 37 градусов по Цельсию, мы видим временные затраты на восстановление исходного времени свертывания. Иными словами, полная деградация Эноксапарина до бездействия.

Что касается антикоагулянтного эффекта, то мы видим это уже на полторы минуты. По сути, происходит 100% восстановление исходного времени свертывания. Изучив этот временной ход, мы решили использовать пятиминутную инкубацию в качестве стандартной предварительной инкубации крови перед измерением времени свертывания.

Пробирки для этого анализа на месте оказания медицинской помощи были немного изменены по сравнению с тем, как мы получаем их от производителя. Эти пробирки изначально содержались в активаторе каолина, который присутствует для измерения активированного времени свертывания. Мы обнаружили, что когда мы используем трубку без активатора, это значительно увеличивает ее чувствительность.

Мы назвали этот анализ минимально активированным, потому что считаем, что единственным возможным источником активации теперь будет стеклянная поверхность трубки и, возможно, магнит. Магнит является неотъемлемой частью автоматизированного анализа. Эти трубки вращаются в лунках трубок, и когда магнит захватывается сгустком плотности, что приводит к потере его движения, это обнаруживается и сигнализирует о завершении коагуляции.

Мы также изучили анализ с использованием активированного омикроном картриджа Platin time, активируемого частичным тромбом. Анализ проводится по идентичной схеме. В этой системе присутствует немного больше активации.

Нашим первым шагом является восстановление гепариназы лилии в том виде, в котором мы получаем ее во флаконе. Добавляем во флакон 0,25 мл физраствора и затем даем примерно 20 секунд для полного растворения. Затем мы отсасываем все содержимое флакона в туберкулиновый шприц, обычно восстанавливая около 0,2 мл на следующем этапе.

Добавки для предварительной инкубации добавляются к свежевзятым образцам крови, содержащим эноксапарин в вакуумных пробирках объемом три мл. Первое издание представляет гепариназу, которая в настоящее время смешивается. Далее следует указание, что речь идет о добавлении 0,2 мл физиологического раствора в пробирку, содержащую эноксапарин, но не гепариназу для сопоставимого общего объема VO.

С помощью встроенного таймера прибора отсчитываем 300 секунд. То есть пять минут предварительной инкубации. Вакуумные трубки удаляются после завершения предварительной инкубации.

Заключительным этапом является перенос двух мл предварительно инкубированных образцов в наши минимально активированные пробирки. Эти трубки предварительно заполняются сотней микролитров 0,25 молярного хлорида кальция для инициирования коагуляции. Эта первая пробирка предварительно инкубирована с гепариназой.

Второй образец содержит эноксапарин, но не содержит гепариназу. Таймеры показывают время, прошедшее с момента добавления хлорида кальция, и теперь мы видим, что первый образец уже готов. То есть верхний флакон в 200 секунд требуется для завершения коагуляции.

Образец, который не содержал гепариназы, обрабатывается дольше и уже завершен. Это симуляция нашего типичного результата с добавлением в кровь 0,4 международных единиц Эноксапарина на мл. Это примерно на 45 секунд сокращает время свертывания при данной концентрации эноксапарина или на 18% уменьшает время свертывания.

Как видно, обнаружение свертываемости крови автоматизировано, а время на приборе сохраняется до завершения проверки. Следует отметить, что мы фактически тестировали этот анализ при более низкой концентрации – 0,1 международной единицы Эноксапарина на мл. Как мы отметили во введении, это концентрация, которая может присутствовать через 12 часов после приема типичной терапевтической дозы Эноксапарина.

Мы смогли надежно обнаружить и при этой концентрации.