ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Общий Мы рекомендуем оттаивания не более одного образца в данный момент времени, чтобы обеспечить удобство в обращении. Обработчик должен заботиться, чтобы не оставить культур при комнатной температуре и низкой CO2 в течение длительных периодов времени. Все центрифугирования живых клеток происходит при температуре 500-600 мкг в течение 5 мин при комнатной температуре. MEFs (мышь эмбриональных клеток для подачи) <ol><li> Предварительно теплой MEF средствах массовой информации до 37 ° C. Удалить MEF флакон от -80 ° C и сразу же погрузить нижнюю часть трубки в 37 ° С водяной бане. Это должно занять около 30-45 секунд, прежде чем клетки 80% талой (малая часть замороженных слева). </li><li> Быстро довести трубку ламинарном боксе, спрей вниз с 70% спиртом, и передачи клеткам подогретого СМИ. </li><li> Аспирируйте раствора желатина из плит подготовлено раньше. </li><li> Алиготе 2 мл раствора в MEF падение мудрым образом в каждый из шести скважин. Будьте уверены, чтобы распределять равномерно MEFs о хорошо. Дата пластины MEF, и места в 37 ° С инкубатор ночь, чтобы позволить MEFs приложить к пластине. </li><li> После 6 часов MEFs будет прикреплен к пластине. Лучше всего использовать MEF пластин через 24-48 часов после покрытия. НЕ используйте MEF пластина, которая в течение 4 дней. </li><li> Предварительно теплых оттенков средств массовой информации и 0,05% трипсин / ЭДТА до 37 ° C Под капотом prelabel один стерильные 50 мл коническую трубку. </li><li> Тщательно аспирата оттенков средств массовой информации из культура должны быть разделены. Осторожно промыть скважин с 2 мл 1X фосфатным буферным раствором (PBS) в каждую лунку. Аспирируйте PBS. Добавить 0,75 мл 0,05% трипсин / ЭДТА к колодцу. </li><li> Замените крышку, и наблюдать клетки под 4-кратным увеличением. MEFs окружающих оттенков колонии должны начать отказаться. Когда MEFs достаточно округлые и границ оттенков колонии грубая, возвращение пластины к капоту. Этот процесс должен занять около 5 минут, абсолютно не дольше 10 минут, или ваши клетки не будут заново расти. </li><li> Аккуратно пипетку вверх и вниз, стиральная дно колодца, пока монослой MEF полностью съемный (монослой является липким и могут оставаться в одной части). </li><li> Передача клеточной суспензии в 50 мл коническую трубку с дополнительным медиа оттенков. Спиновые трубки клеток 500xg в течение 5 минут, аспирацию от средств массовой информации, будьте осторожны, чтобы не потревожить осадок клеток. </li><li> Для пластины на новые пластины MEFs, добавить надлежащим определенного объема клетки дополнительных средств массовой информации оттенков, и пипетки раствор 5-7 раз с автоматизированной пипетки. </li><li> Удалить MEF средств массовой информации из свежих пластины MEFs. </li><li> Алиготе падение оттенков решение мудрым в каждую лунку, убедившись, что для распространения капель равномерно о хорошо. Без тряски плиты, осторожно вернуть клеткам 37 ° С инкубатор ночь, чтобы оттенки колонии семени. </li><li> Оттенки клетки выходят из разделить должны вести себя так же, тех, кто прибывает из оттепель. </li></ol>

<ol><li>Edmond, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nosocomial+bloodstream+infections+in+United+States+hospitals%3A+a+three-year+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Nosocomial bloodstream infections in United States hospitals: a three-year analysis.</a> Clin. Infect. Dis. 29, 239-244 (1999).</li>
<li>Ramage, G., Bachmann, S., Patterson, T. F., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Investigation+of+multidrug+efflux+pumps+in+relation+to+fluconazole+resistance+in+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Antimicrob.+Chemother%22%5BJournal%5D)">Investigation of multidrug efflux pumps in relation to fluconazole resistance in Candida albicans biofilms.</a> J. Antimicrob. Chemother. 49, 973-980 (2002).</li>
<li>Srinivasan, A., Uppuluri, P., Lopez-Ribot, J., Ramasubramanian, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+High-Throughput+Candida+albicans+Biofilm+Chip%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Development of a High-Throughput Candida albicans Biofilm Chip.</a> PLoS ONE. 6, 19036-19036 (2011).</li>
<li>Ramage, G., Vandewalle, K., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+biofilm+formation+by+Candida+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Rev.+Iberoam.+Micol%22%5BJournal%5D)">Characteristics of biofilm formation by Candida albicans.</a> Rev. Iberoam. Micol. 18, 163-170 (2001).</li>
<li>Pierce, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+and+reproducible+96-well+plate-based+method+for+the+formation+of+fungal+biofilms+and+its+application+to+antifungal+susceptibility+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protoc%22%5BJournal%5D)">A simple and reproducible 96-well plate-based method for the formation of fungal biofilms and its application to antifungal susceptibility testing.</a> Nat. Protoc. 3, 1494-1500 (2008).</li>
<li>Lee, M. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+cellular+microarray+for+high-throughput+toxicology+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional cellular microarray for high-throughput toxicology assays.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 59-63 (2008).</li>
<li>Meyerhofer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristics+of+resist+films+produced+by+spinning%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physics%22%5BJournal%5D)">Characteristics of resist films produced by spinning.</a> Journal of Applied Physics. 49, (1978).</li>
<li>Ramage, G., Vande Walle, K., Wickes, B. L., Lopez-Ribot, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Standardized+method+for+in+vitro+antifungal+susceptibility+testing+of+Candida+albicans+biofilms%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents+Chemother%22%5BJournal%5D)">Standardized method for in vitro antifungal susceptibility testing of Candida albicans biofilms.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 45, 2475-2479 (2001).</li>
<li>Chandra, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biofilm+formation+by+the+fungal+pathogen+Candida+albicans%3A+Development%2C+architecture%2C+and+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Bacteriology%22%5BJournal%5D)">Biofilm formation by the fungal pathogen Candida albicans: Development, architecture, and drug resistance.</a> Journal of Bacteriology. 183, 5385-5394 (2001).</li>
<li>Jabra-Rizk, M. A., Falkler, W. A., Meiller, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fungal+biofilms+and+drug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Emerg.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Fungal biofilms and drug resistance.</a> Emerg. Infect. Dis. 10, 14-19 (2004).</li>
<li>Tobudic, S., Lassnigg, A., Kratzer, C., Graninger, W., Presterl, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antifungal+activity+of+amphotericin+B%2C+caspofungin+and+posaconazole+on+Candida+albicans+biofilms+in+intermediate+and+mature+development+phases%5BTitle%5D)+AND+%22Mycoses%22%5BJournal%5D)">Antifungal activity of amphotericin B, caspofungin and posaconazole on Candida albicans biofilms in intermediate and mature development phases.</a> Mycoses. 53, 208-214 (2010).</li>
</ol>

В этом видео мы продемонстрировали, как мы обычно оттенки человеческих прохождения линии эмбриональных стволовых клеток в нашей лаборатории. Эффективное и регулярное расщепление и пассажи очень важны для поддержания здоровых человеческих эмбриональных стволовых клеток. Трипсин опосредованный переход является существенным преимуществом линий оттенков клетки, однако, важно не переусердствовать trypsinize культур или иметь большую долю отдельных клеток во время повторного Платтинг.

СМИ оттенков 651,5 мл КО-500 мл DMEM PenStrep 6,5 мл 6,5 мл GlutaMAXTM NEAA 6,5 мл 2-меркаптоэтанол 0.5ul KO сыворотки Замена 65 мл 65 мл Plasmanate bFGF2 (10 нг / мл окончательный) 0,65 мл

Пассирования оттенков эмбриональных стволовых клеток человека линий с Трипсин

Passaging HuES Human Embryonic Stem Cell-lines with Trypsin.

В этом видео показано, как в нашей лаборатории регулярно проходы оттенки человеческих линий эмбриональных стволовых клеток трипсином. Человека эмбриональные стволовые клетки являются артефактами культуры клеток, и, как правило, приобретают кариотипические аномалии с высокой удвоений популяции. Правильное пассажей имеет важное значение для поддержания здорового, недифференцированной, karyotypically нормальные оттенки человеческих стволовых эмбриональных клеточных культур. Во-первых, расширение культуры промывают в PBS для удаления остатков средств массовой информации и сотовых мусора, то клетки с наложением минимальный объем теплого 0,05% трипсина-EDTA. Трипсин остается на клетки на срок до пяти минут, после чего клетки аккуратно выбили с 2 мл серологические пипетки. Клеточной суспензии, собирается и смешивается с большим количеством оттенков средств массовой информации, то клетки собирают нежные центрифугирования. Инактивированной трипсина СМИ смесь снять, и клетки ресуспендировали в подогретого оттенков СМИ. Соответствующем соотношении разделить рассчитывается (в основном от 1:10 до 1:20), и клетки снова высевали на 1-2 день старые пластины, содержащей монослоя облученного мышиных эмбриональных фибробластов фидерные клетки. Вновь посеянных оттенков культуры пластина не трогать в течение 48 часов, то средства массовой информации меняется каждый день после этого. Важно, чтобы не trpsinize до суспензии отдельных клеток, так как это увеличивает риск появления аномалий кариотипа.

В этом видео показано, как в нашей лаборатории регулярно проходы оттенки человеческих линий эмбриональных стволовых клеток трипсином.

В этом видео мы демонстрируем, как в нашей лаборатории на регулярной основе проводится пассирование линий эмбриональных стволовых клеток человека HuES с использованием трипсина. Эмбриональные стволовые клетки человека являются артефактами...

Это, где вы запустили техники? О, где я вас учил? Белчер.Да.В первый раз, когда я учил тебя, Бел, я провел лето в своем T.Yeah.И это было похоже на то, что нам там нравились хрящи. И поэтому мне очень понравилась социальная культура там. А потом в Университете Хопкинса, на последнем курсе, я работал с разными проектами, так что мне, как и в инженерии, было гораздо больше о попытках, мы проектируем трехмерное это.

passaging-hues-human-embryonic-stem-cell-lines-with-trypsin

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

В этом видеоролике показано, как выращивать человеческие эмбриональные стволовые клетки (ЭСК) на мышиных эмбриональных фибробластов (MEF) фидерные клетки. Часть 1 из 3.

С MEFs к Матригель I: пассажи ЭСК в присутствии MEFs

Дифференциация ESC совпадает с камерного типа специфические изменения в структуре и составе хроматина. Обнаружение этих изменений дает ценную информацию о механизмах, которые определяют stemcellness и дифференцировки клеток. Хроматин иммунопреципитации (чип) представляет собой ценный метод препарировать молекулярные механизмы, лежащие дифференциации стволовых клеток.

Хроматин Иммунопреципитация из человеческих эмбриональных стволовых клеток

В этом видеоролике показано, как поддержать рост человеческих эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) в фидер бесклеточных условиях и как непрерывно прохождения ЭСК в питатель бесклеточных условиях. Подтверждение чЭСК плюрипотентности, выращенные в питатель бесклеточных условиях с помощью иммунофлуоресценции микроскопии также продемонстрирована. Часть 3 из 3.

С MEFs к Матригель 3: пассажи из ЭСК Матригель на Матригель

Кариотипирование представляет собой простой и полезный метод широко используется для обнаружения генетических изменений. Здесь мы опишем шаг за шагом протокол для распространения хромосомы подготовки человеческих эмбриональных стволовых клеток для мониторинга хромосомной статуса этих клеток поддерживается в культуре.

Хромосомные Подготовка распространения человеческих эмбриональных стволовых клеток для Кариотипирование

Мы описываем небольшую молекулу-протокол для дифференциации мышиных эмбриональных стволовых клеток в клетки-предшественники олигодендроцитов (OPC). Этот протокол генерирует Olig2 + + NG2 OPCs с высоким КПД на 30 дней дифференциации. Мы также опишем метод для создания "пики" OPCs, что позволяет вести огонь потенциалов действия.

Дифференциация эмбриональных стволовых клеток в олигодендроцитов прекурсоров

Направленной дифференцировки ЭСК в специфические клетки вызвал большой интерес в регенеративной медицине. Мы предоставляем краткие, шаг за шагом протокол для...

Судьба картирование человеческих эмбриональных стволовых клеток на формирование тератома

Микро-расчлененный эксплантов техника прочный и надежный метод выделения пролиферативной скелетные мышечные клетки от молодых, взрослых и эмбриональных мышц в качестве источника стволовых клеток скелетной мускулатуры. Уникально, эти клетки были клонально производных для производства скелетных мышц линий стволовых клеток для трансплантации в естественных условиях.

Взрослые и эмбриональные скелетных мышц Microexplant культуры и выделение скелетных мышц стволовых клеток

Этот протокол обеспечивает простой и эффективный способ размножения человеческих плюрипотентных стволовых клеток (hPSCs) с использованием только кондиционированных сред, полученных из человеческой плаценты, в чашке, покрытой желатином, без дополнительных экзогенных добавок или специфических для hPSC синтетических субстратов.

Роман Культура модель человека плюрипотентных стволовых клеток Распространение на Желатин в Плацента-баром СМИ

Этот метод может быть использован для исследования укорочения саркомера с использованием плюрипотентных кардиомиоцитов, полученных из стволовых клеток, с флуоресцентными белками саркомера.

Саркомерное укорочение кардиомиоцитов, полученных из плюрипотентных стволовых клеток, с использованием флуоресцентно-помеченных саркомерных белков.

Чтобы избежать ограничений, связанных с ферментативным или механическим пассажем эмбриональных стволовых клеток человека (чЭСК) и индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека (ИПСК), культивируемых на фидерных клетках, мы разработали быстрый, эффективный, экономичный и высокопродуктивный метод сбора колоний чЭСК или ИПСК, поддерживаемых на слое фидерных клеток фибробластов крайней плоти человека, с использованием ЭДТА-опосредованной спайки.

Быстрый, экономичный, бесферментный пассаж плюрипотентных стволовых клеток человека на фидерных клетках путем опосредования этилендиаминтетрауксусной кислотой

В этом протоколе представлена дифференцировка остеокластов человека из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) и описаны методы характеризации остеокластов и предшественников остеокластов.

Дифференцировка и характеристика остеокластов из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека

Узнайте метод пассирования эмбриональных стволовых клеток человека линии HuES с использованием трипсина. Этот протокол помогает поддерживать здоровые недифференцированные культуры и минимизировать риск кариотипических аномалий.

Пассирования оттенков эмбриональных стволовых клеток человека линий с Трипсин

Больше видео