Контролируемые травма шейного Laceration у мышей

Общая цель эксперимента заключается в создании воспроизводимого разрывного поражения спинного мозга мыши. Это достигается за счет обнажения шейной пластинки сзади при нахождении животного в аппарате травматологической системы Луисвилля. В качестве второго шага используется специально разработанное стабилизирующее устройство для фиксации целевого позвонка позвоночника мыши.

Далее определяется целевой спинной мозг между пластинчатыми дугами после удаления желтой связки в конце. Шейный дорсальный полусекция на глубине 0,75 миллиметра точно создается с помощью качающегося лезвия и микродрайвера. Основным преимуществом методики, которую мы разработали в лаборатории, является создание очень точного метода получения разрывной травмы спинного мозга.

Это важно, потому что методы, которые использовались до сих пор, то есть ножницы или скальпель, создали проблемы, которые являются неполными и неточными методами травмы спинного мозга. Теперь у нас есть методы, позволяющие избежать ушиба спинного мозга, смещения спинного мозга в сторону от разрывного устройства и чрезмерного кровоизлияния, которое происходит при травме спинного мозга. Используя эту технику, мы можем создать очень точный метод, который позволяет избежать метода визуальной оценки глубины повреждения спинного мозга.

Используя эту технику, мы чувствуем, что можем революционизировать методы экспериментальной травмы спинного мозга, используемые в модели разрыва, которая может быть по своей сути важна для регенерации аксонов, а также для поиска лекарства от травмы спинного мозга. Эинг Джанг, нейрохирург, который является нейрохирургическим научным сотрудником в нашей лаборатории, начинает эту процедуру со стерилизации следующих хирургических инструментов, двух-трех пар щипцов, трех пар микроножниц, иглы 30-го калибра, шовной нити micro URS, иглодержателя кожных зажимов и аппликатора клипс. Затем продезинфицируйте после этого стабилизатор позвоночника, обезболите мышь коктейлем из кетамина, ксилазина или триэтанола внутрибрюшинно.

Далее сбрейте волосы с шеи мыши. Очистите кожу раствором повидон-йода и 70%-ным спиртом. Затем перенесите мышь на операционный стол с помощью предварительно разогретой грелки.

Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы предотвратить высыхание роговицы. После индукции анестетиком сделайте задний разрез кожи шейного отдела по средней линии от опута до подкожно-жировой клетчатки питомца нижнего шейного отдела позвоночника. Под микроскопом сделайте разрез кожи по средней линии между трапециевидными мышцами в точке С-2 и втяните полуфиналистку головные мышцы в боковом направлении.

Далее продлите рассечение средней линии мышцы слегка до Т-двух остистых отростков, который служит надежным ориентиром. Отделите мышцы от Т-двух остистых отростков. Затем удаляют хрящевую часть Т-двух остистых отростков.

После этого рассеките параспинальные мышцы от пластинчатых дуг с помощью микроножниц с обеих сторон от С четыре до Т два. Она начинается рядом с остистыми отростками и распространяется по обеим пластинчатым дугам до фасеточных суставов. После того как боковые грани обнажаются, поместите мышь на U-образный канал стабилизатора позвоночника мыши.

Затем поместите рычаги стабилизатора мыши из нержавеющей стали под открытые грани с обеих сторон. Как только рычаги будут на месте, затяните винты с накатанной головкой стальных рычагов, чтобы обездвижить позвоночник под микроскопом. Удалите flamum-связку между С-пятью и С-шестью пластинчатыми дугами, чтобы обнажить нижележащую твердую мозговую оболочку между межпластинчатым пространством.

Используйте иглу 30 калибра для создания небольшой dur otomy и микроножницы для расширения dur otomy. Теперь спинной мозг готов к контролируемому рваному поражению. При этом стабилизатор позвоночника и мышь помещаются на сцену системы травматологии Луисвилля, к которой прикреплено лезвие, положение которого контролируется микродрайверами.

Способен к трем диапазонам движений для выполнения поражения дорсального сечения HEMI между пятью-шестью пластинками C с плоской лопастью диаметром 2,3 мм, прикрепленной к осциллятору. Установите амплитуду качающегося лезвия на 0,5 миллиметра, так как более низкая амплитуда может уменьшить легкость полного разрыва шнура. Затем включите переключатель лезвия вибратора под микроскопом, поместите спинной мозг мыши непосредственно под вибрирующее лезвие.

Затем поднимите столик по направлению к качающемуся лезвию с помощью записи микродрайвера. Нулевое положение, когда лезвие едва касается тыльной вены спинного мозга, измеряется глубина разрыва спинного мозга относительно нулевого положения. Затем поднимите положение рабочей области с помощью микродрайвера.

Поворот ручки микродрайвера на 360 градусов поднимает сцену на 0,25 миллиметра. Таким образом, поражение дорсального геми-сечения диаметром 0,75 миллиметра создается путем трехкратного поворота ручки микродрайвера, когда лезвие начинает рвать спинной мозг, смазывать операционное поле солевым раствором. Как только заданная глубина будет достигнута, выключите переключатель вибратора, опустите столик, поддерживающий мышь, и зажим с режущего лезвия.

Удалите кровь путем орошения хирургическим раствором места операции. Затем высушите участок ватными ватными палочками, так как гемостаз обычно происходит в течение одной минуты. В конце снимите мышь со стабилизатора позвоночника и закройте кожу нержавеющей сталью.

Мишель зажимает. Шейный отдел позвоночника фиксируется путем помещения рук под боковые фасетки, а затем фиксации винтами с накатанной головкой, как показано на этом рисунке, твердая мозговая оболочка обнажается между слоистой оболочкой C пять-шесть C, шесть - семь и C seven - Tone без какого-либо удаления кости. Здесь показаны сагиттальные виды четырех разрывов спинного мозга на глубине 0,5, 0,8, 1,1 и 1,4 миллиметра.

Они свидетельствуют о высокой степени точности при использовании данной методики. Одной из проблем, которая была присуща возникновению травм спинного мозга, было отсутствие стабилизации шейного отдела позвоночника. Используя стабилизатор позвоночника, разработанный нашей группой, мы теперь можем создать абсолютно неподвижный шейный отдел позвоночника.

Это позволит усилить травму спинного мозга с помощью ушиба спинного мозга, инъекций спинного мозга, а также трансплантации клеток в спинной мозг для всех методов исследования спинного мозга.