January 5th, 2015
Позвоночный стабилизации необходимо для минимизации изменчивости, а также для производства в соответствии экспериментальные повреждения спинного мозга. Использование настраиваемого устройства стабилизации в сочетании с ударного устройства NYU / Mascis, мы продемонстрировали здесь необходимое оборудование и процесс формирования воспроизводимых шейки матки (C5) травмы позвоночника Hemi-contusive шнур у взрослых крыс.
Общая цель этой процедуры заключается в создании последовательной, точной и воспроизводимой травмы спинного мозга с использованием нового стабилизатора позвоночника, который можно использовать с несколькими устройствами ТСМ. Это достигается путем тщательного рассечения тканей, окружающих шейные позвонки, с осторожностью, чтобы свести к минимуму кровотечение. Вторым шагом является помещение животного в стабилизирующее устройство и стабилизация позвонков с помощью зубчатых стабилизирующих рук.
Затем выполните ламинэктомию, чтобы обнажить целевую область спинного мозга. Последним шагом является установка U-образного стабилизирующего устройства на массы, импактор Нью-Йоркского университета и выполнение ТСМ. В конечном счете, с помощью нового стабилизирующего устройства генерируется последовательная воспроизводимая ушибная травма спинного мозга. Сегодня мы продемонстрируем использование нашего уникального устройства хирургической стабилизации в сочетании с импактором спинного мозга Нью-Йоркского университета для создания последовательных воспроизводимых благоприятных травм спинного мозга.
Мы используем это стабилизирующее устройство в нашей лаборатории для создания травм спинного мозга, а также для трансплантации, микроинъекционных операций и визуализации. Начните эту процедуру с очистки хирургической поверхности 70% этанолом. Положите грелку на операционную область и включите грелку.
Затем поместите стерильную марлю, ватные палочки и автоклавные хирургические инструменты в операционную зону. После покрытия поверхности стерильной хирургической простыней используйте стерилизатор микрогранул для межоперационной стерилизации хирургических инструментов. Также очищайте стабилизатор с содержанием этанола 70% до и между операциями.
Теперь обезболите крысу путем внутрибрюшинной инъекции кетамина ксилазином, и подтвердите глубину анестезии с помощью раздражителя пальца ноги. Затем нанесите защитную мазь на глаза животного, чтобы предотвратить пересыхание роговицы. После этого выбрейте спину крысы от среднего грудного отдела до головы.
Затем удалите мех с помощью пылесоса, оснащенного фильтром HEPA. Затем нанесите Бетадин на выбритую область в качестве хирургического скраба и очистите область салфетками с 70% изопропиловым спиртом. Подкожно введите от 0,01 до 0,05 мг на килограмм бупренорфина и 5 мг на килограмм карпрофена перед хирургической процедурой.
Затем следует вводить бупренорфин каждые восемь-12 часов, а карпрофен один раз в день в течение первых четырех-семи дней после операции. С помощью лезвия скальпеля сделайте трех-четырехсантиметровый разрез по средней линии на коже от основания головы до средней части грудной клетки. Затем определите среднюю линию фасции и подкожных мышц перед зимующей железой в нижней части шеи.
Разрежьте трапецию и другие мышцы по средней линии, чтобы уменьшить кровоизлияние. Найдите жировую ткань, лежащую под мышцами, по средней линии. Разрежьте параостистые мышцы по-хорошему.
Впоследствии разделяют мышечные слои с помощью небольшого тканевого ретрактора до тех пор, пока не будет достигнут уровень грудного Т-двух остистых отростков. Затем отрежьте мышцу, соединенную с Т-двумя остистыми отростками, и используйте эту структуру в качестве анатомического ориентира. Далее удалите хрящевой кончик Т-двух остистых отростков для улучшения видимости шейных позвонков.
Отделите параспинальные мышцы латерально от остистых отростков и слоните, однако пощадите мышцу, покрывающую пластинку С3, чтобы предотвратить кровотечение. Затем разрежьте мышцы над ламини латерально по направлению к фасеткам с обеих сторон позвоночного столба. После того как спинномозговые ламини обнажаются, поместите животное в U-образный канал стабилизатора.
Определите местоположение позвонка С-5, подсчитав остистые отростки от ориентира Т-2 до Т-1, С-7, С-6 и, наконец, С-5. В этой процедуре расположите два рычага стабилизатора из нержавеющей стали так, чтобы подвешивать животное, поместив зубчатые края рук под боковые грани С-пяти-шести позвонков. После фиксации рук с позвонками на месте отрегулируйте стабилизирующий аппарат, чтобы позвоночный столб был выровнен и центрирован
.Наконец, зафиксируйте рычаги, затянув там винты с накатанной головкой стабилизатора. Затем разрежьте связки между спинномозговыми отростками и ламини в точках С четыре на пять и С пять на шесть. Чтобы определить край пластинки C five с помощью микро ron, отрежьте половину пластинки справа C five для SCI.
После ламинэктомии транспортируйте животное со стабилизатором с операционного стола к травматологическому устройству. Закрепите животное вместе со стабилизатором на креплении, которое прикреплено к устройству для нанесения травм. Точно выровняйте поршень по мишени спинного мозга с помощью бокового микроманипулятора при большом увеличении.
Расположите зоны входа в дорсальный корешок C five и C six на открытой дорсальной поверхности спинного мозга без длительной отомики. Направьте поршень в середину двух идентифицированных DRE Z и на полпути между средней линией и боковым краем спинного мозга. Используя ударное устройство NYU masses с наконечником диаметром 2,5 мм, произведите контузию C five HEMI с помощью 10-граммового стержня на высоте падения 12,5 мм.
Проверьте травму визуально по ушибу на спинном мозге и проверьте параметры травмы, предоставленные программным обеспечением Нью-Йоркского университета. Затем зашить мышцы и мягкие ткани и закрыть разрез кожи хирургическими скобами. Нанесите антибактериальную мазь на область операции и введите животному 5,0 мл стерильного 0,9%-ного физиологического раствора подкожно для увлажнения.
После этого поместите животное в среду с контролируемой температурой с влажной пищей на подстилке и бутылкой с водой с длинным носиком для легкого доступа, расположенной на полу клетки. Обеспечьте уход, чтобы обеспечить адекватное восстановление, прежде чем возвращать животное в домашнюю клетку. На этом рисунке показано показание очень хорошего удара с данными измерений процента погрешности удара, скорости стержня, начальной высоты и времени запуска, все значения находятся в пределах допустимой погрешности.
И наоборот, на этой панели представлены данные, полученные в результате неправильного удара, вызванного неправильной стабилизацией позвоночного столба и ошибкой при обнулении ударного стержня на поверхности спинного мозга. Перед установкой высоты стержня ударного элемента это стабилизирующее устройство обездвиживает спинной мозг. Тем не менее, большим преимуществом этого устройства является мобильность, которую оно обеспечивает для транспортировки стабилизированного животного от операционного стола к станции микроинъекции трансплантации к ударному устройству или станции визуализации.
Стабильность и воспроизводимость являются решающими факторами для экспериментальных моделей травм спинного мозга с целью минимизации вариабельности и оптимизации уточнения эффектов терапии, все из которых важны для применения в клинической практике и поиска лекарства от травмы спинного мозга.
В этой статье представлен метод генерирования согласованных и воспроизводимых травм спинного мозга у взрослых крыс с использованием нового стабилизатора позвонков. Процедура нацелена на минимизацию вариабельности в экспериментальных травмах спинного мозга путем применения индивидуального стабилизирующего аппарата наряду с ударным устройством NYU/MASCIS.
Reliable preclinical spinal cord injury (SCI) models are critical for translational neuroscience and therapeutic development. This vertebral stabilization method addresses a key reproducibility bottleneck by minimizing spinal column movement during contusive injury, directly impacting the predictive confidence of SCI studies. Enhanced model consistency supports robust target validation and risk-adjusted portfolio advancement in neuroregeneration pipelines.
This stabilization method integrates at the interface of early discovery, lead identification, and preclinical validation for SCI and neuroregeneration programs.