14 мая 2013 г.
Мы описываем наши протоколы для мыши трансплантата arteriosclerois (GA) моделей, которые включают вмешательство сегменте судна мышь в получателем же инбредной линии. По обратным скрещиванием дополнительных генетических изменений в сосуд донора, модель может оценить влияние специфических генов в GA.
Общая цель данного эксперимента заключается в пересадке донорского сосуда в брюшную аорту реципиента. Первым делом необходимо рассечь грудную аорту у мыши-донора. Далее в брюшной аорте мыши-реципиента создаются участки анастомоза.
Затем донорский сосуд имплантируется в брюшную аорту реципиента. В конечном счете, успешная трансплантация может быть достигнута благодаря неповрежденной двигательной функции задних конечностей мыши-реципиента. Таким образом, эта модель поможет нам понять патогенез склероза трансплантатных артерий.
И это технически сложная задача, которая требует большой практики практики и того, чтобы пациент был идеальным. Так что демонстрировать процедуру будет доктор Чен и ассистентка Луанна. Для начала подтвердите правильную глубину анестезии у донорской мыши.
После обезболивания поместите мышь в лежачем положении на поднос под операционным микроскопом. Очистите грудную клетку с помощью повторных скрабов йодом и спиртом после обнажения сердца и промывания его физиологическим раствором, удалите сердце и легкие, чтобы обнажить всю длину грудной аорты. После визуализации начните осторожно рассекать грудную аорту вдали от окружающих тканей.
Когда дойдут поясничные ветви, перевяжите их возле аорты шелковым швом, прежде чем отрезать. Когда освободится от окружающих тканей, иссекается вся грудная аорта. После выделения промойте донорскую аорту гепаринизированным физиологическим раствором и храните его в этом растворе на льду до трансплантации.
После обеспечения адекватной анестезии у мыши-реципиента сбрейте шерсть с передней части брюшной полости. Накройте глаза офтальмологической мазью и очистите область, как видно ранее. Когда все будет готово, поместите мышь в лежачем положении на лоток под операционным микроскопом.
Надрежьте брюшную стенку по средней линии от мечевидной кости до лобка, а затем используйте ретрактор, чтобы раздвинуть стенку и обнажить брюшную полость. Используйте больше увлажненной солевым раствором марли, чтобы обернуть оставшиеся области живота, и используйте это, чтобы втянуть прямую кишку в правую сторону живота. Далее переместите репродуктивные органы вниз.
Не забывайте поддерживать открытые ткани влажными, нанося солевой раствор. Регулярно выявляйте инфраренальную аорту, расположенную проксимальнее почечного сосуда и дистальнее тупой бифуркации аорты. Тщательно рассеките его, чтобы отделить от нижней полой вены.
Определите лигат и отрежьте все мелкие ветви, исходящие от этого сегмента аорты. После того, как сегмент аорты изолирован, поместите сосудистый зажим на каждый конец примерно в пять миллиметров друг от друга. Затем создайте участки анастомоза, пересектив брюшную аорту между зажимами.
С помощью острых микроножниц резецируют небольшой сегмент аорты с одного разреза конца, чтобы вместить донорский аортальный трансплантат. Промойте сегменты аорты между зажимами с помощью гепаринизированного физиологического раствора, чтобы удалить остаточную кровь. Не забывайте периодически орошать оба образца аорты гепаринизированным солевым раствором на протяжении всей процедуры.
Далее пересектите обе стороны донорской аорты, чтобы создать сегментный трансплантат длиной 2,5 миллиметра для трансплантации. Поместите донорский аортальный трансплантат в положение, выравнивающее проксимальный и дистальный концы для непрерывных швов. Установите швы на три и девять часов в положении обоих концов первыми.
Далее соедините срезанные края тремя-четырьмя ходовыми швами и завяжите беговые швы к оставшимся швам двойным узлом для прерывистых швов. Сконструируйте четыре участка анастомоза в трех- и девятичасовом положениях с обеих сторон трансплантата. Первый. Далее соедините края среза тремя-четырьмя стежками, расположенными между каждым из этих участков.
Как только швы будут наложены, освободите дистальный зажим, чтобы обеспечить ретроградный поток в трансплантат. Определите любые места кровотечения и наложите дополнительные швы в течение трех минут. Когда будет достигнут удовлетворительный гемостаз, освободите проксимальный усилитель зажима.
Проходимость графтов может быть подтверждена наличием энергичной пульсации. Если пульсация уменьшается, введите гепарин в сосуд для предотвращения тромбоза. Когда все будет готово, верните кишечник в брюшную полость и смыкайте мышечные и кожные слои.
Поместите мышь-реципиента в теплую, чистую клетку и наблюдайте за ней в течение одного-двух часов, пока не вернется сознание. Оцените двигательную функцию мыши после выздоровления и повторно, на второй день, операция по трансплантации успешна, если не наблюдается дисфункции задних конечностей. Гистологический анализ артериальных трансплантатов, взятых через четыре недели после операции, выявил увеличенную толщину стенки сосуда у женщин-реципиентов донора-мужчины.
Тем не менее, атеросклероз трансплантата не наблюдался в группе мужчин-самцов. В этом примере грудная артерия от донора-мужчины была трансплантирована мыши, нокаутирующей интерферон гамма, а затем экспрессия интерферона гамма была индуцирована у мыши-реципиента. Перед взятием проб.
Через несколько недель гистологический анализ артериальных трансплантатов показал, что в группе лечения не наблюдалось атеросклероза трансплантата. Теперь вы знаете, как делать эту операцию. Продолжайте пробовать.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
В данной статье описываются протоколы создания модели артериосклероза трансплантата у мышей, при этом особое внимание уделяется пересадке донорского сосуда реципиенту. Модель предназначена для оценки влияния специфических генетических изменений на развитие склероза артериального трансплантата.
Артериосклероз трансплантата остается основной причиной долгосрочной неудачи трансплантации, что обусловлено пролиферацией гладкомышечных клеток в интиме трансплантата. Современные доклинические модели часто оказываются неэффективными из-за быстрой иммуноопосредованной потери трансплантата, что ограничивает возможность изучения механизмов патологии. Описанные мышиные модели решают эту проблему, обеспечивая длительное выживание донорских клеток и развитие IFN-γ-зависимой патологии, что способствует валидации мишеней и снижению рисков при изучении механизмов в исследованиях сосудистых трансплантатов.
Данная модель вписывается в континуум исследований — от валидации мишени до доклинической оценки, что позволяет проводить изучение механизмов несостоятельности сосудистых протезов до этапа оптимизации ведущего соединения.