Введение в работу с микропипеткой

Микропипетка — это важный инструмент, используемый для точного измерения небольших объемов жидкости. Этот исследовательский инструмент, который можно встретить во многих научных лабораториях по всему миру, выпускается в различных модификациях и размеров. Однако, несмотря на различия между моделями, все микропипетки работают по одному и тому же принципу для точного измерения микролитровых количеств жидкости. С микропипетками используются одноразовые наконечники, которые, так же как и сами микропипетки, бывают разных размеров.

Все микродозаторы имеют одинаковые базовые компоненты для аспирации и дозирования жидкостей. Плунжер расположен в верхней части дозатора и используется для набора или вытеснения жидкости в зависимости от того, на какое расстояние он нажат или отпущен.

Регулятор объема используется для изменения объема переносимой жидкости.

Показания окна индикации объема считываются сверху вниз. В зависимости от используемого микродозатора цифры отражают разные порядки величин вашего измерения объема. Здесь представлено измерение 370 µL.

Одноразовые наконечники устанавливаются на нижнюю часть микродозатора.

Кнопка сброса и шток сброса наконечников работают совместно для извлечения наконечников дозатора, когда их необходимо утилизировать.

Семейство микродозаторов включает несколько моделей разных размеров, предназначенных для переноса точных диапазонов объемов.

Здесь вы видите дозаторы, выстроенные в соответствии с диапазонами объемов, которые может переносить каждый из них. Например, P-1000 переносит от 200 до 1000 µl, в то время как самый маленький в группе, P-2, переносит от 0,2 до 2 µl.

Каждого представителя семейства можно узнать по числу в верхней части поршня, а также по цвету, что позволяет четко определить модель и объем жидкости, который ей удобно переносить.

Иногда для эксперимента требуются и другие представители семейства микродозаторов, такие как P5000, P100 и P10. Вместе эта расширенная группа позволяет переносить объемы жидкости от 0,2 до 5000 µl.

Для обеспечения максимальной точности и прецизионности переноса жидкости используются наконечники разных размеров, которые часто (хотя и не всегда) имеют цветовую маркировку для удобства распознавания и подходят к разным моделям дозаторов. Что касается объемов, белые наконечники для микродозаторов обычно используются для объемов от 0,5 до 2,5 μl, желтые — для 1–200 µl, а синие — от 200 до 1000 μl.

При использовании микродозатора сначала выберите инструмент с подходящим диапазоном для объема, который необходимо перенести. Правильный выбор дозатора может стать решающим фактором успеха или неудачи эксперимента.

Для начала установите на шкале необходимый объем. Чтобы увеличить объем аспирации, поворачивайте колесико против часовой стрелки, проходя желаемую отметку на одну треть оборота, а затем медленно уменьшайте значение до финальной метки. Чтобы уменьшить объем, поворачивайте колесико по часовой стрелке.

Помните, что цифры в окне отображения объема имеют разный порядок величин в зависимости от модели микродозатора. Например, слева мы видим P1000 со значением 370 µl. Здесь ноль находится в разряде тысяч, 3 — в разряде сотен, а 7 — в разряде десятков. Справа находится P200, отображающий 159 µl, где 1 стоит в разряде сотен, 5 — в разряде десятков, а 9 — в разряде единиц.

После установки объема выберите подходящий наконечник.

Теперь держите микродозатор вертикально, прижимая узкую часть корпуса к ладони, а выступающую часть опирая на указательный палец.

С легким нажимом опустите поршень примерно до половины хода до первого стопора или до момента, когда вы почувствуете возрастающее сопротивление.

Это действие вытесняет воздух из наконечника дозатора.

Удерживая поршень в нажатом положении, погрузите наконечник в образец на глубину 1-3 mm. Плавно отпустите поршень в исходное положение, подождите одну секунду, пока жидкость переместится в наконечник, а затем извлеките дозатор из образца.

Когда поршень возвращается в исходное положение, жидкость втягивается за счет вакуума, созданного вытесненным воздухом.

Осмотрите наконечник, чтобы подтвердить, что был набран необходимый объем жидкости и в наконечнике нет пузырьков воздуха.

При переносе образца в нужную емкость держите микродозатор под углом 10-45° к внутренней стенке принимающего сосуда. Это предотвратит образование пузырьков в наконечнике. Чтобы выпустить жидкость, плавно и осторожно нажмите на поршень до первого стопора, чтобы начать дозирование, а затем, приложив большее усилие, нажмите поршень до второго стопора, чтобы «выдуть» остатки жидкости из наконечника.

Полностью выньте наконечник из сосуда, после чего верните поршень в исходное положение.

Теперь с помощью кнопки выброса осторожно удалите наконечник в соответствующий контейнер. Будьте внимательны, так как вылетающие наконечники могут сработать как снаряды и потенциально травмировать ваших коллег по лаборатории.

Чтобы микродозаторы работали исправно и механизм регулировки внутреннего объема сохранял свои свойства, никогда не поворачивайте колесо регулировки объема выше или ниже установленного диапазона конкретного микродозатора. Это может привести к поломке прибора.

Во избежание перекрестного загрязнения образцов меняйте наконечник после каждого переноса объема.

При работе с микродозаторами важна последовательность действий оператора. Плавное нажатие на поршень обеспечит оптимальные результаты эксперимента. Наконец, помните, что для поддержания высокой производительности микродозаторов приборы следует всегда хранить в вертикальном положении, когда они не используются.

Теперь, когда мы рассмотрели основные принципы работы и правила использования микропипеток, давайте обсудим некоторые распространенные лабораторные способы применения микрообъемного переноса, а также модификации этого прибора.

Микропипетки часто используются для переноса клеточных суспензий в культуральные планшеты для проведения различных экспериментов.

В сочетании со специальными наконечниками микропипетки могут применяться для аккуратного внесения образцов при использовании аналитических методов, таких как гель-электрофорез ДНК.

Микропипетки также могут использоваться для механического измельчения тканей с целью получения суспензий из отдельных клеток.

В лаборатории можно встретить и модификации микропипеток, работающие по принципу вытеснения воздуха.

Репитеры (многоканальные дозаторы с функцией повтора) позволяют осуществлять серийное дозирование малых объемов после первоначального забора большего объема раствора. Такие пипетки очень полезны для переноса одного и того же объема образца в большое количество емкостей.

Многоканальные пипетки обычно используются для переноса объемов в диапазоне 20-200 μl и удобны для заполнения целых рядов 96-луночных планшетов.

Вы только что посмотрели вводное видео JoVE по использованию микродозаторов.

В этом видео мы рассмотрели: что такое микродозатор и как он работает, как осуществлять аспирацию и дозирование определенного объема жидкости, меры предосторожности, а также различные варианты применения микродозаторов. Спасибо за просмотр и помните: для своих экспериментов выбирайте подходящий тип пипетки.