1: Введение в микропипеттор

Микропипеттор является важным инструментом, используемым для точного измерения небольших объемов жидкости. Этот исследовательский инструмент, который можно найти в многочисленных исследовательских лабораториях по всему миру, бывает нескольких форм и размеров. Однако, несмотря на различия между микропипетками, все они работают одинаково для точного измерения микролитров жидкости. Микропипетторы используются с одноразовыми наконечниками, которые, как и микропипетки, бывают разных размеров.

Все микродозаторы используют одни и те же основные компоненты для аспирации и диспенсирования жидкостей. Поршень находится в верхней части пипетки и используется для забора или выталкивания жидкости в зависимости от положения, в которое он нажимается или отпускается.

Диск регулировки громкости используется для изменения объема перекачиваемой жидкости.

Показания на дисплее громкости считываются сверху вниз. В зависимости от используемого микропипеттора цифры отражают различные порядки величин при измерении объема. Здесь можно посмотреть мерку за 370 микролитров.

Одноразовые наконечники загружаются на дно микропипеттора.

Кнопка извлечения наконечника и вал для извлечения наконечников работают вместе, чтобы извлечь наконечники пипеток, когда их необходимо выбросить.

Семейство микропипеток включает в себя несколько элементов различных размеров, которые передают точный диапазон объемов.

Здесь вы можете видеть, как семейство выстраивается в ряд в соответствии с диапазонами громкости, которые каждый из них может передавать. Например, Papa P-1000 дает от 200 до 1000 мкл, в то время как младший из них, П-2, доставляет от 0,2 до 2 мкл.

Каждого из членов семьи можно узнать по цифре в верхней части вантуза, а также по цвету, который дает понять, кто они и какой объем они могут комфортно перенести.

Время от времени для эксперимента появляются другие родственники микропипеток, такие как дядя П5000, тетя П100 и двоюродный брат П10. Вместе эти расширенные семейства могут помочь в перемещении жидкости объемом от 0,2 до 5000 мкл.

Чтобы еще больше обеспечить точный и аккуратный перенос жидкости, наконечники пипеток разных размеров, часто, но не всегда, имеют цветовую маркировку для удобства распознавания и используются для разных размеров пипеток. Что касается переносимого объема, то белые наконечники микропипетторов обычно передают от 0,5 до 2,5 мкл, желтые наконечники - от 1 до 200 мкл, а синие - от 200 до 1000 мкл.

При использовании микропипеттора сначала выберите прибор с подходящим диапазоном для объема, который вы хотите передать. Правильный выбор пипетки может означать разницу между успешным или неудачным экспериментом.

Для начала отрегулируйте диск на нужную громкость. Чтобы увеличить объем аспирации, поверните диск против часовой стрелки, проходя нужный объем на одну треть оборота, а затем медленно уменьшая до конечной отметки. Чтобы уменьшить громкость, поверните диск по часовой стрелке.

Имейте в виду, что эти цифры в показаниях объема имеют разный порядок величины в зависимости от микропипеттора. Например, слева мы видим P1000, показывающий 370 ?l. В месте тысяч стоит ноль, в сотнях — 3, а в десятках — 7. Справа находится P200, отображающий 159 ?l с 1 в сотне, 5 в десятках и 9 в единицах.

После того как громкость будет установлена, выберите чаевые.

Теперь держите микропипетку в вертикальном положении так, чтобы узкая часть корпуса была на ладони, а выступ — на указательном пальце,

используя легкое давление, чтобы нажать на поршень примерно на полпути к первому упору или когда вы начнете чувствовать большее сопротивление.

Это действие вытесняет воздух с наконечника пипетки.

Удерживая поршень нажатым, погрузите наконечник на 1-3 мм в образец. Плавно отпустите поршень обратно в исходное положение, подождите одну секунду, пока жидкость переместится в наконечник, а затем извлеките пипетку из образца.

Когда поршень возвращается в исходное положение, жидкость втягивается в вакуум, создаваемый вытесненным воздухом.

Осмотрите наконечник, чтобы убедиться, что набрано нужное количество жидкости и что на наконечнике нет пузырьков воздуха.

При переносе пробы в нужный сосуд держите микропипеттор под углом 10-45° к внутренней стенке приемного сосуда. Это предотвратит образование пузырьков на кончике. Чтобы вытолкнуть жидкость, слегка нажмите на поршень до 1-го упора, плавно начните дозирование жидкости, а затем, приложив более сильное сопротивление, нажмите на поршень до второго упора, чтобы «выдуть». Последняя капля жидкости с кончика.

Полностью извлеките наконечник из сосуда, а затем отпустите поршень обратно в исходное положение.

Теперь с помощью кнопки извлечения осторожно выбросьте наконечник пипетки в соответствующую розетку. Будьте внимательны к тому, что вы делаете, потому что выброшенные наконечники могут действовать как снаряды и потенциально могут ранить ваших товарищей по лаборатории.

Чтобы микропипетки работали хорошо и сохранили внутренний механизм регулировки объема, никогда не поворачивайте регулятор громкости выше или ниже определенного диапазона микропипеттора. Вы можете сломать инструмент.

Чтобы избежать перекрестного загрязнения между образцами, меняйте наконечник после каждого объемного переноса.

При работе с микропипетками важна последовательность действий оператора. Плавное давление плунжера позволит получить оптимальные экспериментальные результаты. Наконец, помните, что для поддержания микропипеток в отличном состоянии всегда храните инструменты в вертикальном положении, когда они не используются.

Теперь, когда мы рассмотрели основные принципы работы и принципы использования микропипеток, давайте обсудим некоторые распространенные лабораторные применения микрообъемных переносов, а также вариации этого инструмента.

Микропипетторы часто используются для переноса клеточных суспензий на культуральные планшеты для различных экспериментов.

В сочетании со специализированными наконечниками микропипетторы можно использовать для тщательной загрузки образцов для аналитических методов, таких как электрофорез в ДНК-геле.

Микропипетторы также могут использоваться для механического разрушения тканей с целью получения одноклеточных суспензий.

Варианты микропипеттора, которые работают на основе вытеснения воздуха, также можно найти в лаборатории.

Пипетки-репитеры позволяют выполнять последовательное пипетирование меньших объемов после первоначальной аспирации большего объема раствора. Пипетки действительно полезны для переноса одного и того же объема образца в большое количество емкостей.

Многоканальные пипетки обычно используются для переноса объемов в диапазоне 20-200 мкл и полезны для загрузки целых рядов 96-луночных планшетов.

Вы только что посмотрели статью JoVE «Введение в микропипетки».

В этом видео мы рассмотрели: что такое микропипеттор и как он работает, как отсасывать и дозировать образец жидкого объема, некоторые меры предосторожности и различные области применения микропипеток. Спасибо, что смотрите и помните, выберите правильную пипетку для ваших экспериментов.