дрозофила Содержание

Успешное исследование Drosophila melanogaster зависит от правильного содержания и содержания этого ценного модельного организма. В следующем видео мы обсудим шаги, необходимые для обеспечения правильного питания, содержания и обращения с мухой.

Несмотря на то, что дрозофила меланогастер широко известна как плодовая муха, на самом деле она питается микроорганизмами, такими как дрожжи, которые растут на ферментированных фруктах. В лабораторных условиях рацион мухи модифицируется в практических целях. Существует несколько рецептов, и все они содержат необходимые компоненты: сахар и дрожжи. Следующий рецепт разработан Университетом Индианы в Блумингтоне, известным своим огромным разнообразием нахлыстовых запасов. Он состоит из: стерильной воды, дрожжей, соевой муки, желтой кукурузной муки, агара для текстуры, кукурузного сиропа и пропионовой кислоты для подавления роста плесени и бактерий. Эти ингредиенты соединяют, нагревают, перемешивают, а затем распределяют по пластиковым флаконам с корпусом с помощью насоса. После наполнения флаконы закупоривают ватным верхом, оборачивают и охлаждают при температуре 4 °C. После затвердевания пища стерилизуется с помощью автоклавирования.

Теперь, когда мы немного узнали о том, чем питаются мухи, давайте посмотрим, где они живут и как с ними обращаются.

Для размещения мух используются самые разные емкости. Флаконы используются для содержания мух и оптимально содержат 50-100 взрослых особей. Бутылки используются для более крупных культур и содержат 300-600 взрослых мух. Инкубаторы контролируют окружающую среду и способны вмещать сотни флаконов и бутылок. Нормальные условия хранения мух – 25 °C и относительная влажность 60-65%.

При работе с мухами важно практиковать надлежащую маркировку и документацию, а также поддерживать чистоту окружающей среды, чтобы сохранить целостность нахлыстовых линий и экспериментов. Контейнер необходимо менять, когда примерно половина куколок закрыта, или покинула оболочку куколки. Оболочки будут казаться прозрачными.

К вашему сведению, стадия куколки происходит между личиночной и взрослой стадиями, и это время, когда личинки инкубируются и развиваются во взрослую особь. Чтобы определить оболочки куколок как прозрачные, поднесите контейнер к источнику света и осмотрите куколку.

Мух переносят во флаконы со свежей средой — причудливое название корма для мух — с помощью процесса, известного как «переворачивание мух». Мухи не могут выжить на потрескавшейся от сухости пище или загрязненной плесенью или бактериями.

Чтобы перевернуть мух, сначала осторожно постучите флаконом от мух по прилавку, чтобы сбить мухи со стенок флакона. Затем быстро снимите пробку, и быстро переверните мух из старого контейнера в новый. Этот процесс выполняется быстро, чтобы предотвратить побег мух или их раздавливание пробкой, а также предотвратить попадание незакрепленных мух во флакон во время переворачивания.

В то время как переворачивание мух является предпочтительным методом массового переноса дрозофилы, для сортировки мух требуется обезболивание. Здесь будут рассмотрены два метода обезболивания: охлаждение и использование углекислого газа. Чтобы охладить мух, поместите культуру в морозильную камеру при температуре -20 °C на 8-12 минут. Затем поместите мух на охлажденное плоское рабочее место для выбора. Мух также можно обезболить холодом, охладив их прямо на замерзшей поверхности.

Углекислый газ является предпочтительным методом обезболивания, потому что он не вызывает острой смертности у мух или опасности для исследователя. Система подачи CO2 состоит из: резервуара для CO2; трубка, соединенная с иглой, для обезболивания мух во флаконах и флаконах; и трубка, соединенная с пластиной CO2 для анализа под микроскопом.

Чтобы обезболить мух, введите иглу CO2 через пробку. В качестве альтернативы можно постучать контейнером по поверхности, снять упор и быстро перевернуть мух на пластину с CO2, сохраняя закрытое уплотнение до тех пор, пока мухи не станут неподвижными. С помощью щетки или щипцов аккуратно переместите мух в новую емкость.

Чтобы отбросить нежелательных мух, сбросьте их в морг для мух, который состоит из большой бутылки, наполненной изопропанолом или этанолом и минеральным маслом, увенчанной воронкой.

Теперь, когда мы рассмотрели, как мухи содержатся и обрабатываются в лаборатории, давайте посмотрим, как условия содержания и кормления изменяются для различных экспериментов.

Некоторые эксперименты требуют альтернативного жилья для того, чтобы содержать большее количество мух.

В этом эксперименте исследователь использует клетку для популяции мух для сбора большого количества эмбрионов. Клетка для популяции мух представляет собой прозрачный пластиковый ящик, способный вместить тысячи мух. Исследователь выпускает нужных мух из нескольких бутылок в клетку для популяции мух, а затем помещает в клетку агаровые пластины для сбора эмбрионов.

Некоторые эксперименты требуют манипулирования диетой мух.

В этом эксперименте исследователь хочет наблюдать за реакцией убегания трансгенных мух, которые экспрессируют активируемый светом ионный канал в нейронах, регулирующий реакцию убегания мух. Диета дрозофилы дополнена «полностью транс-ретиналью», который является кофактором для этого канала и позволяет ему функционировать. Это делается путем расплавления пищи и добавления реагента. Затем муха подвергается воздействию синего света, который активирует канал и вызывает реакцию убегания, а также измеряется время, затраченное на полет.

Для экспериментов можно манипулировать различными условиями содержания и обращения.

В этом эксперименте была создана сложная «башня электропередачи» для изучения влияния физических упражнений на дрозофилу. Силовая башня представляет собой машину, которая постоянно поднимается и опускается, используя естественную реакцию мухи на движение вверх против силы тяжести, что известно как «негативный геотаксис».

Производительность мух, испытываемых в силовой башне, измеряется с помощью быстрого итеративного отрицательного геотаксиса, или сокращенно RING-анализа. Мухи в пустых флаконах помещаются перед фотоаппаратом. Флаконы постукиваются, и записываются пройденные расстояния. Этот эксперимент показывает, что по сравнению с контрольной группой, физические упражнения оказывали положительное влияние на активность с течением времени.

В этом видеоролике JoVE рассказывается о содержании и содержании Drosophila melanogaster. После просмотра этого видео вы должны уметь готовить питательные среды для мух, правильно определять подходящее жилье, переворачивать мух и проводить простые эксперименты. Спасибо за просмотр!