Мышиной модели субарахноидального кровоизлияния

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы вызвать стандартизированное субарахноидальное кровоизлияние у мышей. Это достигается путем подключения животного под наркозом к контрольным устройствам для наблюдения за физиологическими условиями во время операции. Вторым шагом является применение датчиков для измерения церебральной перфузии и внутричерепного давления в качестве ключевых параметров для индукции кровотечения.

Далее субарахноидальное кровоизлияние индуцируется путем эндоваскулярной перфорации нити. Последним шагом является перфузия животного и изоляция мозга для визуализации экстравазированного распределения крови. Основное преимущество применения этой техники на мышах, а не на рексе, заключается в том, что мы можем использовать трансгенных животных.

Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, испытывают трудности, потому что интубация, мультимодальный мониторинг физиологии, а также подготовка сосудов довольно сложны для выполнения у мышей. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, так как хирургические этапы сложны для изучения. Демонстрировать процедуру будет Кэтрин Шула, аспирант из моей лаборатории.

Она имеет более чем двухлетний опыт выполнения данной модели SAH. Для начала животное под наркозом на наклонной платформе, работающее под микроскопом, отводит язык с помощью изогнутых щипцов, чтобы определить местонахождение голосовых связок. После визуализации интубируйте во время вдоха с помощью трубки, изготовленной из венозного катетера 20 калибра.

Затем поместите мышь в положение лежа и проверьте правильность расположения трубки с помощью куска ваты или микрокапнографа, если она правильно размещена. Подсоедините интубационную трубку к респиратору. Проветривайте мышь комнатным воздухом, дополненным 25% кислородом.

Подсоедините интубационную трубку к микрокапнографу. Поддерживайте конечное парцирационное парциальное давление углекислого газа на уровне 30 миллиметров ртутного столба, регулируя частоту проветривания. После введения ректального температурного щупа поместите животное на грелку для поддержания температуры тела На уровне 37 градусов Цельсия поместите датчик кольцевого пульсоксиметра на правую заднюю лапу.

Далее сделайте разрез от глаза до уха. Втяните кожу и рассеките левую височную мышцу от височной кости. После обнажения приклейте лазерный доплеровский щуп расходомера на левую височную кость.

Удерживайте щуп в фиксированном положении до тех пор, пока клей не застынет. Во время сверления просверлите отверстие диаметром примерно 1,5 миллиметра в левой височной кости. Охладите кость с помощью солевого раствора.

Чтобы предотвратить тепловое повреждение, введите внутричерепной зонд давления в полость черепа и выдвиньте его вперед как можно дорсальнее, чтобы предотвратить повреждение тканей и кровотечение. После того, как щуп будет правильно размещен, зафиксируйте и запечатайте его цементом и дайте ему высохнуть в течение пяти минут. Когда цемент высохнет, осторожно переверните мышь в лежачее положение.

Используя стандартные методики, катетеризируйте левую бедренную артерию для непрерывного мониторинга артериального давления. После установки подсоедините бедренный катетер к устройству для мониторинга артериального давления. Сначала раскройте кожу ножницами от грудины до подбородка.

Рассеките соединительную ткань и отодвиньте слюнные железы в сторону, чтобы обнажить левую общую сонную артерию. Изолируйте ОСА от окружающих тканей, стараясь не повредить блуждающий нерв, расположенный в той же соединительнотканной оболочке. Далее осторожно обнажите и изолируйте внутреннюю сонную артерию и наружную сонную артерию.

После выделения перевязать ЭХА как можно дальше, предварительно договорившись о двух дополнительных лигациях вокруг ЭКА для последующего использования с помощью окклюзии аппликатора, временно ОСА и ВСА с микрозажимами. Аккуратно оттяните зажимы назад, чтобы убедиться, что они наложены правильно. Для индукции прокачки мы используем 12-миллиметровую нить пролина с пятью нулями.

Вырежьте небольшое отверстие в ECA с помощью ножниц для сосудов и вставьте нить. Как только нить будет на месте, закройте место введения с помощью одной из заранее подготовленных перевязок. Затем снимите микрозажимы с помощью аппликатора с микрозажимами, чтобы вызвать кровотечение.

Продвигайте нить накала в ВСА до тех пор, пока ВЧД не поднимется. Внезапное повышение ВЧД указывает на индукцию кровотечения, немедленно удалите филамент и перевязайте ЭХА, последовательно закрыв обе заранее подготовленные лигации. Это предотвращает кровотечение из места введения.

Зашивайте рану на коже и следите за физиологическими параметрами животного еще 20 минут. В конце этого периода удалите зонды ICP и LDF после транскардиальной перфузии. Удалите мозг и оцените распределение крови в субарахноидальном пространстве перед кровотечением, ВЧД составляет около четырех миллиметров.

Утечка ртути приводит к резкому увеличению ВЧД до 120 миллиметров. Затем значения ВСП ртути стабилизируются в течение пяти минут на уровне около 30 миллиметров ртутного столба. Кроме того, артериальное давление повышается сразу после кровотечения.

Репрезентативные значения индукционного лазерного допплеровского расходомера после индукции кровотечения показывают резкое снижение церебральной перфузии: реперфузия до индивидуально иного уровня происходит в течение пяти минут после инсульта. В этом примере наблюдается распределение крови по снабжающим артериям мозга и щелям мозжечка. Через три часа после кровоизлияния красные линии указывают на распределение крови по артериям, снабжающим мозг.

Боковая ипсилатеральная сторона кровоизлияния была покрыта большим количеством крови, чем видно контралатеральное полушарие. Вот кривая выживаемости после САК у 49 самцов, C 57 BL у шести мышей. При попытке проведения этой процедуры важно следить за физиологическими условиями, чтобы обеспечить воспроизводимое количество кровотечения после его развития.

Этот метод проложил путь исследователям в области субретинального кровоизлияния к изучению механизмов траектории ишемии головного мозга вскоре после инсульта.