Маточно-трубное Эмбрион Трансфер и Вазектомия в мышиной модели

Общей целью этой процедуры является перенос преимплантационных эмбрионов в матку псевдобеременного реципиента 2,5 DPC. Это достигается путем предварительного обнажения яичника, ОКТ и первого участка матки. Далее UCT прокалывается иглой.

Далее через отверстие, продвигающееся в просвет матки, вводится стеклянная капиллярная пипетка. Наконец, эмбрионы выпускаются в матку. В конечном счете, количество рожденных детенышей используется для показа выживаемости перенесенных эмбрионов до имплантации.

Основное преимущество этой методики перед таким методом, как перенос эмбрионов матки, заключается в том, что стенка матки не прокалывается, что позволяет избежать кровотечения и тока эмбриона. Все эксперименты на животных были одобрены комитетами по уходу за животными и их использованию в районе Белтсвилля в соответствии с рекомендациями Министерства сельского хозяйства США по уходу за животными и их использованию. После введения анестезии и анальгетиков самцу мыши с доказанной брачной эффективностью и подтверждения того, что животное правильно усыплено, поместите мышь на теплую сцену и с помощью электрических машинок для стрижки удалите шерсть из вентральной области между двумя воображаемыми поперечными линиями, расположенными на 0,5 сантиметра и 2,5 сантиметра выше пениса.

Используйте 10% повидон-йода и 70% этанол для дезинфекции выбритого участка. Затем, используя перевязочные зубчатые щипцы для удержания кожи в медиальной линии живота, выполните продольный разрез кожи диаметром от 10 до 15 миллиметров примерно на один сантиметр над половым членом. Затем используйте рассекающие зубчатые щипцы для удержания линейной альбы и ножницы для разрезания мышцы микро.

Рассекая зубчатые щипцы, захватывает подушечку для снятия яичка с одной стороны и тянет ее, чтобы обнажить обширные яички и придаток яичка. Обширная полоска расположена медиально по отношению к семенникам и на ней хорошо различима свободная трубка, при этом удерживая васты динов пламенными щипцами до тех пор, пока они не станут красными и используя их для разреза и прижигания васт динов в двух точках одновременно, при разрезе следует удалить примерно пятимиллиметровую часть и оставить два четко разделенных прижигаемых конца двигать яичко, эпи и обширное почтительное отношение обратно в брюшную полость и повторите процедуру на другом яичке. Затем с помощью пяти нулевых рассасывающихся швов сделайте один или два горизонтальных шва матраса в мышце и используйте один или два ножницы для ран для наложения швов на кожу.

После идентификации самца переместите его в клетку, помещенную на теплую сцену, и наблюдайте за ним, пока он не оправится от анестезии. Запишите возможные случаи, возникшие во время переноса вазэктомии, и добавьте антибиотик в питьевую воду. Чтобы подготовить манипуляцию с эмбрионом, стеклянной пипеткой, начните с полировки кончиков стеклянных капилляров.

Во избежание повреждения держателя пипетки. Размягчите среднюю часть стеклянного капилляра, нагревая его тонким пламенем, одновременно слегка вращая капилляр обеими руками. Как только капиллярный участок станет мягким и податливым, быстро выньте его из пламени и потяните за оба конца, чтобы сузить его внешний диаметр до 130-150 микрометров После того как стекло остынет, используйте карандаш с алмазным наконечником, абразивный камень или пилочку для ногтей, чтобы разрезать его, слегка надрезав узкий конец и потянув с обеих сторон.

Излом должен быть чистым и перпендикулярным. Наконечник полируется путем очень быстрого сжигания, оставляя апертуру от 100 до 130 микрометров, пипетки можно хранить для последующего использования. После подготовки хирургической области и оценки надлежащей анестезии, как описано ранее в этом видео, с животным на теплой сцене, используйте электрические машинки для стрижки шерсти из спинной области между коленями и дистальными ребрами.

Переместите реципиента в теплую сцену под стереомикроскопом и поместите его в положение лежа сбоку от хирурга. Накройте область стерильным полотенцем с отверстием, обнажающим выбритый участок, и осветите операционную зону. Далее, с помощью перевязочных щипцов удерживать кожу в месте, расположенном на черепе, на одной трети линии между последним ребром и бедрами и на тыльной стороне на одной трети линии между спиной и животом.

С помощью ножниц выполните поперечный разрез кожи в один сантиметр. Яичник или жировая подушечка, окружающая яичник, будет видна через стенку тела. Выполните поперечный разрез от 0,3 до 0,5 сантиметра в стенке тела над яичником или жировой подушечкой в месте, где разрез не разрезает крупные кровеносные сосуды.

Загрузите в манипулятивную пипетку для эмбрионов cz BH medium, взяв небольшой пузырь воздуха. Введение от пяти до 10 эмбрионов с минимальным количеством среды. И, наконец, занимаем еще один маленький пузырь воздуха и небольшое количество среднего.

Используйте микрорассекающие зубчатые щипцы, чтобы захватить жировую подушечку, окружающую яичник, и потяните ее к головке мыши, чтобы обнажить яичник, ОКТ и небольшую часть верхней части матки из брюшной полости. Удержание мундштука аспиратора во рту в готовности к использованию с помощью микрорассекающих зубчатых щипцов. Переместите UCT и обнажите маточное трубчатое соединение, сохраняя доступ к маточно-маточному трубчатому соединению недоминирующей рукой.

Возьмите слегка изогнутые щипцы для микродиссекции и поместите их чуть ниже соединения маточных труб, захватывая UCT примерно на два миллиметра выше этой части. Далее, удерживая маточное соединение труб с помощью слегка изогнутых микродиссекционных щипцов. С помощью иглы 27 калибра проколите участок UCT рядом с щипцами.

Затем введите манипулятивную пипетку для эмбриона в отверстие и продвигайтесь через маточное соединение труб к матке. Продвижение не более чем на три миллиметра вглубь органа для предотвращения повреждения эндометрия. Осторожно подуйте, чтобы выпустить эмбрионы в матку, следя за тем, чтобы оба пузырька воздуха проходили через матку и не вводя больше воздуха.

После извлечения пипетки возьмитесь за брюшную подушечку, чтобы переместить проток и яичник обратно в брюшную полость перед наложением швов. Мышцы и кожа, как показано ранее в этом видео, позволяют самке восстановиться, подобно мужским зажимам, которые могут быть удалены через 10 дней после переноса эмбрионов. Для получения более подробной информации обратитесь к текстовым протоколам.

Перенос эмбрионов из маточных труб Tails Utero обеспечивает возможность переноса эмбрионов в матку, что позволяет избежать некоторых осложнений, связанных с переносом эмбрионов матки. В этой таблице мы показываем результаты, полученные при передаче CD одного взрыва, подвергшегося различным манипуляциям, получателям CD One. В соответствии с описанным протоколом выживаемость до срока или выживаемость до Е 15 аналогична у всех эмбрионов.

Просто культивируется in vitro из эмбрионов на стадии зиготы, подвергнутых инъекции IPSC, для получения химерных детенышей и эмбрионов, у которых была удалена зона и которые подверглись воздействию лентивируса за семь часов до переноса эмбрионов. Таким образом, перенос эмбрионов через маточные трубы является надежным методом переноса особенно сложных эмбрионов, таких как эмбрионы без зиты и инкубированные с лентивирусом При попытке проведения этой процедуры важно быть как можно более нежным по отношению к реципиенту и эмбрионам.