Миелин олигодендроцитов гликопротеин (МОГ _35-55) Индуцированные Экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит (ЕАЕ) в C57BL / 6 мышей

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы индуцировать животную модель экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита, которая имитирует клинические и патофизиологические особенности рассеянного склероза. Это достигается путем предварительного приготовления антигена и адъюванта, а также коклюшного токсина. Вторым этапом является подкожное введение эмульсии антигена и КФА эмульсии и коклюшного токсина внутрибрюшинно.

Через два дня м снова вводят коклюшный токсин внутрибрюшинно. После этого животных взвешивают и ежедневно оценивают их клиническую оценку. В конечном счете, клинические признаки экспериментального аутоиммунного и энцефаломиелита обычно могут наблюдаться между девятым и четырнадцатым днем после иммунизации.

Основное преимущество этой методики по сравнению с существующими протоколами, которые включают, например, токсичные агенты, такие как ризон или различные варианты ИИЭ, заключается в том, что все они имитируют особенности рассеянного склероза, которые сильно отличаются по основным патологическим особенностям, таким как вовлечение адаптивной иммунной системы. Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, испытывают трудности из-за сложного проведения иммунизации. Это абсолютно необходимо для снижения стресса для животных и обеспечения оптимальной иммунизации после их развития.

Эта модель открыла путь исследователям в области нейроиммунологии к характеристике нокаутированных животных. Для определения новых молекулярных мишеней для лекарств или для тестирования перспективных кандидатов в лекарства начните с разведения лиофилизированного пептида MOG 35-55 в двойной дистиллированной воде до конечной концентрации два миллиграмма на миллилитр. На одну мышь необходимо 100 микролитров этого раствора и при приготовлении теряется некоторый объем.

Поэтому сделайте в 1,5-два раза больше необходимого раствора. Храните пептидный раствор при температуре минус 20 градусов Цельсия, чтобы сделать полные фроны адъювантом или КФА помещают 100 мг высушенной микобактерии в туберкулез. H 37 RA в ступку и растираем ее пестиком до получения тонкого порошка.

Затем добавьте 10 миллилитров неполного фронса адъювантом, чтобы получить 10 миллиграмм на миллилитр раствора носка КФА. Запас CFA можно хранить при температуре четыре градуса Цельсия до тех пор, пока он не понадобится в день иммунизации. Разбавьте исходный раствор CFA неполным адъювантом фреса до конечной концентрации два миллиграмма на миллилитр, тщательно перемешайте для ресуспензии твердого материала и поместите его на лед.

После размораживания аликвоту пептидного раствора MOG составляет от 35 до 55. Положите его на лед. Используйте двухмиллилитровый шприц и канюлю 27 калибра, чтобы набрать один миллилитр КФА.

Затем с помощью второго двухмиллилитрового шприца и канюли 20 калибра наберите один миллилитр раствора MOG 35 to 55. Удалите все пузырьки воздуха и соедините оба шприца трехходовым клапаном. Когда трехходовой клапан почти закрыт, протолкните эмульсию из одного шприца в другой и тщательно перемешайте обратно в течение не менее 10 минут.

По окончании раствор должен быть белым, жестким и вязким без разделения фаз. Теперь дайте эмульсии постоять не менее 30 минут или не более чем за несколько дней до иммунизации. В день иммунизации наберите раствор в один из двух шприцев и подсоедините канюлю 27 калибра.

Восстановите 50 мкг коклюшного токсина в 500 микролитрах дважды дистиллированной воды. Для стокового раствора 100 микрограммов на миллилитр храните исходный раствор при температуре четыре градуса Цельсия до тех пор, пока он не понадобится. В день иммунизации разведите подвойный раствор коклюша один к 50.

С помощью PBS приготовьте шприц с 200 микролитрами разведенного коклюшного раствора для инъекций, который содержит 400 нанограмм коклюшного токсина и наберите дополнительно 100 микролитров для мертвого пространства ступицы иглы. После обезболивания мыши изофтором оцените уровень анестезии с помощью щипки для пальцев ног. Введите 100 микролитров эмульсии антигена CFA подкожно в два разных участка на каждом заднем боке.

После инъекции под кожей должна образоваться луковичная масса, которая должна сохраняться на протяжении всего эксперимента. Далее следует ввести подготовленный шприц, содержащий 200 микролитров коклюшного токсина, внутрибрюшинно. Убедитесь, что отдельные мыши могут быть легко идентифицированы для ежедневной оценки.

Например, по цветовой маркировке на основании хвостового оперения.