Профилирования Индивидуальный человеческих эмбриональных стволовых клеток путем количественного RT-PCR

Общая цель этой процедуры заключается в профилировании уровней экспрессии генов отдельных эмбриональных стволовых клеток человека с помощью количественной полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией одной клетки, или R-T-P-C-R. Это достигается путем сортировки флуоресцентных активированных клеток для сортировки отдельных клеток в каждой лунке 96-луночного планшета, содержащего буфер для лизиса клеток. Вторым шагом является обратная транскрибация РНК для получения CDNA из лизатов одиночных клеток.

Затем CDNA амплифицируется с помощью полимеразной цепной реакции. Заключительным этапом является количественное выполнение R-T-P-C-R на амплифицированной CDNA. В конечном счете, этот анализ полезен для изучения экспрессии генов в гетерогенных популяциях, таких как эмбриональные стволовые клетки человека.