Оценка функции сосудов у больных с хронической болезнью почек

Общей целью данного эксперимента является оценка функции сосудов у пациентов с хронической болезнью почек, это достигается путем предварительного сбора эндотелиальных клеток сосудов у пациентов. Затем оценивается скорость пульсовой волны аорты для измерения жесткости большой эластической артерии. Затем измеряется опосредованная дилатация плечевой артерии с целью оценки функции эндотелия сосудов.

В конечном итоге можно получить результаты, характеризующие функцию эндотелия сосудов. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в сосудистой области, например, что происходит на клеточном уровне с экспрессией различных белков. Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, испытывают трудности, потому что для освоения ультразвуковой визуализации требуется обширная практика и обучение.

Демонстрировать процедуру будет Лонни Перино, научный сотрудник моей лаборатории. Для начала подготовьте участок с антисептиком местного действия. Далее размещают над участком стерильные фенестрированные простыни.

Обученная медсестра или врач должны установить капельницу и прикрепить адаптер hep lock. Поместите два J-образных провода на простыни, чтобы развернуть J-образную форму. Потяните дугу J на обоих проводах.

После размотки откройте крышку hep lock и подайте JWI в вену примерно на восемь сантиметров. Перед снятием несколько раз протолкните проволоку вперед и назад, чтобы избежать скопления слишком большого количества крови на проволоке. Затем с помощью кусачек отрежьте провода так, чтобы они поместились в коническую трубку объемом 50 миллилитров, содержащую около 30 миллилитров буфера диссоциации.

Повторите эти действия для второго провода, когда сбор образца будет завершен. Вернитесь в мокрую лабораторию. Зажмите провода парой щипцов и удерживайте их внутри трубки, но над раствором, в течение 10 минут.

С помощью моторизованного дозатора промывайте провода с буфером для диссоциации от трубки. Освободите буфер так, чтобы он проходил по всей длине проводов, и стряхните лишнюю жидкость в трубку. Снимите провода и центрифугируйте образец до гранул.

Извлеките образцы и повторно суспендируйте гранулу в PBS перед центрифугированием. В течение еще пяти минут после этого используйте наконечник для пипетки на конце всасывающего шланга, чтобы оставить в трубке около двух миллилитров. Отсосьте оставшуюся часть, не потревожив гранулы.

Повторно суспендируйте гранулу и равномерно распределите образец пипеткой в овальных областях восьми ранее помеченных предметных стекол. Поместите предметные стекла в инкубатор при температуре 37 градусов Цельсия на пять часов перед хранением при температуре минус 80 градусов Цельсия до начала анализа. Объект должен переодеться в одноразовые шорты и лежать на спине в тихой, полутемной комнате с климат-контролем.

Когда все будет готово к началу установки электродов для ультразвукового исследования и нашего устройства для измерения артериальной жесткости. Далее наденьте манжету для измерения артериального давления на предмет. Начните измерять артериальное давление через 20 минут, повторяйте показания до тех пор, пока измерения не окажутся в пределах пяти миллиметров ртутного столба.

Отдыхайте две минуты между каждым чтением и выполняйте не менее трех. Затем пальпируйте пульс в плечевой артерии и поместите сонометр для записи форм плечевых волн. Повторите то же самое для лучевой, бедренной и сонной артерий.

Измерьте расстояние до каждого из этих участков от надгрудинной выемки с помощью рулетки для плечевой, лучевой и сонной артерий и специальной линейки для бедренной кости. Далее рассчитайте скорость пульсовой волны сонной артерии, плечевой сонной артерии и сонной артерии бедренной артерии с помощью специализированного программного обеспечения. Поместите манжету для измерения артериального давления на предплечье дистальнее отростка.

Настройте сосудистое программное обеспечение в режим запуска и запишите не менее 10 сердечных циклов исходной плечевой артерии, ультразвуковые изображения и измерения скорости кровотока. При желании для стабилизации ультразвукового зонда можно использовать механическую руку. Далее накачайте предплечье манжету артериального давления до 250 миллиметров ртутного столба.

И запускаем таймер. Проинструктируйте участника оставаться очень неподвижным. Начните запись скорости, когда таймер покажет срабатывание 4 минут 45 секунд.

Отпустите манжету через пять минут и переключите ультразвук на запись изображений в режиме B. Когда часы показывают пять минут, 10 секунд. Продолжайте запись до тех пор, пока часы не покажут семь минут.

Далее измерьте артериальное давление субъекта. Если систолическое артериальное давление больше или равно 100 миллиметрам ртутного столба, поместите 0,4 миллиграмма сублингвального нитроглицерина под язык пациента и запустите таймер. Начните запись в режиме B, когда часы показывают три минуты, и остановите запись.

Когда часы показывают восемь минут. Систематически эндотелиальные клетки идентифицируются по положительному окрашиванию на VE кадгерин, а ядерная целостность подтверждается положительным окрашиванием на dapi. Кроме того, клетки должны быть окрашены на наличие интересующего белка.

В общей сложности 30 ячеек на слайде должны быть изображены для последующего анализа. Повторите этот процесс для каждого предметного стекла в окрашенной партии, включая предметное стекло для управления VE. Качественное программное обеспечение используется для анализа интенсивности окрашивания первичного антитела, представляющего интерес.

На этом изображении показан исходный диаметр плечевой артерии, полученный при обследовании пациента с хроническим заболеванием почек после отпускания манжеты в течение двух минут. Эта запись показывает изменение диаметра на зубце R. Эти волновые формы были получены на каждой из сонных и бедренных артерий.

Разница во времени и расстоянии была использована для расчета отчета о скорости пульсовой волны аорты. Здесь контрольные клетки и клетки пациента были проанализированы на ядерную целостность с экспрессией эндотелиальных клеток DPI с кадгерином VE и на фермент окислитель N-A-D-P-H оксидаза. При попытке выполнить эту процедуру важно помнить о необходимости получения ультразвуковых изображений, осциллограмм и изображений эндотелиальных клеток высочайшего качества для точной и количественной оценки.

Не забывайте, что работа с человеческими образцами может быть чрезвычайно опасной, и при выполнении этой процедуры всегда следует соблюдать меры предосторожности, такие как ношение соответствующих средств индивидуальной защиты.