Основы ухода за цыплятами и их содержания

Эмбрионы цыплят являются отличной моделью для изучения раннего развития позвоночных, в том числе благодаря простоте и дешевизне их содержания. В отличие от большинства модельных организмов, которые разводят в лаборатории, оплодотворенные куриные яйца закупаются у внешнего поставщика. Кроме того, содержание яиц и работа с ними требуют минимального количества специализированного оборудования. В данном видео будет представлена общая информация о приобретении и содержании куриных яиц, описаны методы, необходимые для работы с развивающимися эмбрионами, и приведены некоторые примеры практического применения этих методов.

Прежде чем обсуждать работу с цыплятами в лаборатории, давайте вспомним, как курицы ухаживают за яйцами в естественных условиях. Хотя яйца уже оплодотворены в момент снесения, развитие цыпленка прекращается при воздействии более низких внешних температур. Снеся около 12 яиц, курица садится на гнездо, чтобы возобновить развитие эмбриона. Во время инкубации курица переворачивает яйца для их равномерного прогрева и чтобы предотвратить прилипание эмбриона к скорлупе. Если все пройдет успешно, через 21 день у матери появится выводок цыплят.

Как же ученые собирают достаточное количество яиц для своих экспериментов? Что ж... это могло бы занять много времени. Поскольку куры широко одомашнены, оплодотворенные яйца можно легко получить из инкубатора или на племенной ферме. Яйца можно заказать даже на определенном этапе развития.

После доставки яиц в лабораторию их можно хранить при температуре 13 - 16 °C до 5 дней. Когда наступит время для начала развития, дайте яйцам прогреться до комнатной температуры, затем перенесите их в ротационный инкубатор при 37 °C и влажности 60% до достижения нужной стадии развития.

Большинство экспериментов на цыплятах требуют нескольких подготовительных этапов, таких как проверка оплодотворенности полученных яиц. Простым способом является использование яркого источника света или оваскопа для освещения яйца. С помощью этого метода, называемого просвечиванием (кандлингом), можно визуализировать внутренние структуры, например сосуды, чтобы подтвердить наличие эмбриона.

Сохранение целостности яйца повышает выживаемость цыпленка, однако скорлупа ограничивает доступ к эмбриону. Чтобы решить эту проблему, исследователи используют метод создания «окна» (виндoуинг).

Начните с того, что положите яйца на бок и отметьте верхнюю часть, чтобы определить сторону, к которой будет приподниматься эмбрион. Чтобы предотвратить повреждение желтка при вырезании окна, удаляют небольшое количество альбумина (яичного белка), чтобы сместить эмбрион подальше от скорлупы. Для этого сначала стерилизуют скорлупу, протерев ее 70% этанолом. После высыхания скорлупы на тупой конец яйца наклеивают кусочек скотча. Затем с помощью стерильной иглы прокалывают скотч и скорлупу. Иглу вводят вертикально вниз, чтобы не повредить желток, и удаляют 5 ml альбумина. Наконец, чтобы предотвратить вытекание альбумина, отверстие заклеивают другим кусочком скотча.

Для вырезания скорлупы наклейте кусочек скотча на область, где планируется создать окно. С помощью ножниц сделайте небольшое отверстие в скорлупе и начните вырезать круглое отверстие. В процессе этого скотч предотвратит попадание фрагментов скорлупы на эмбрион.

Даже после создания окна эмбрионы на ранних стадиях развития может быть трудно визуализировать из-за их малого размера и прозрачности. Для улучшения контраста между эмбрионом и желтком можно использовать разведенные нетоксичные туши (индийские чернила). Тушь вводится в желток под эмбрион и оставляется для диффузии. Теперь эмбрион виден с более высоким контрастом на темном фоне. После проведения экспериментальных манипуляций окно следует снова заклеить скотчем, а яйцо поместить обратно в инкубатор.

Теперь, когда вы ознакомились с основными методами работы с яйцами, давайте посмотрим, как эти приемы используются для проведения экспериментов на эмбрионах цыплят.

Для начала, просвечивание можно использовать для определения расположения эмбриональных структур в целом яйце. Например, внезародышевые оболочки эмбриона цыпленка часто используются для размножения вирусов. Чтобы инфицировать оболочку, проводят просвечивание для обнаружения границы между аллантоической полостью и воздушным мешком, чтобы ввести вирус непосредственно в аллантоическую полость, не повредив эмбрион. После нескольких дней инкубации из аллантоической жидкости можно собрать большое количество вирусных частиц.

Создание «окна» в яйце — чрезвычайно полезная практика, так как она обеспечивает доступ к эмбриону для проведения экспериментов. Многие эксперименты начинаются с доставки ДНК в определенные ткани с помощью микроинъекций. Затем вокруг интересующей ткани размещают электроды и прикладывают электрическое поле, чтобы временно повысить проницаемость клеточной мембраны и обеспечить проникновение нуклеиновых кислот в клетку.

При проведении экспериментов на ранних эмбрионах инъекции туши (индийских чернил) особенно полезны для визуализации прозрачных тканей. Повышение контрастности позволяет исследователям вводить раствор ДНК микроинъекциями в четко определенные области ткани. В конечном итоге этот метод позволяет получить индивидуально маркированные клетки, за которыми можно наблюдать в динамике для отслеживания клеточных делений.

Вы только что посмотрели видео JoVE по содержанию цыплят. В данной презентации были рассмотрены основы обращения с куриными яйцами и ухода за ними, основные методы работы с цыплятами, а также приведены примеры применения этих методов в биологических исследованиях. Спасибо за просмотр!