Введение экспериментальных агентов в мышь

Многие эксперименты зависят от введения агентов мышам. Часто эти агенты вводят для проверки их влияния на биологический процесс. Агенты также могут играть важную роль в подготовке животных к экспериментам. В этом видео мы обсудим важные аспекты введения экспериментальных агентов, инструменты для доставки агентов, некоторые конкретные способы введения и применение этих основных методов.

Итак, какие факторы необходимо учитывать при планировании применения экспериментального препарата?

Первый – это соответствующая доза. Обычно рассчитывается по отношению к весу животного, поэтому обеспечение правильной дозы агента имеет решающее значение.

Также важно учитывать способ введения. Такие свойства, как вкусовые качества, вязкость, вводимое количество, ткань-мишень и желаемая скорость диссеминации, определят, какой из многих доступных способов введения вам следует выбрать. В этом видео мы сосредоточимся на инъекциях, которые являются одним из самых эффективных методов доставки агента.

Прежде чем обсуждать, как проводить инъекцию, давайте познакомимся с основными инструментами для этой методики.

Начнем со шприца. Жидкости хранятся в бочке, которая имеет маркировку, позволяющую точно измерять объем. Поршень помещается внутри цилиндра и используется для приведения в движение его содержимого. } Наконец, наконечник шприца является местом крепления ступицы иглы. На противоположном конце стержня иглы вы найдете скошенный кончик. Будьте осторожны, он очень острый!

Ступицы игл имеют цветовую маркировку, отражающую их размер, или «калибр», при этом более высокие номера калибра указывают на меньшие иглы. Калибры выбираются исходя из желаемого пути доставки: чем меньше или чувствительнее область, тем меньше требуется игла.

Выбрав подходящую иглу и шприц для эксперимента, втяните вещество в бочку, потянув за поршень. Пузырьки воздуха, впрыскиваемые вместе с средством, могут нарушить ткани и нанести вред подопытному животному. Поэтому переверните шприц и осторожно переверните ствол, чтобы любые пузырьки двигались к кончику и выходили. Если возможно, удалите излишки вещества, чтобы убедиться, что пузырьки полностью удалены.

Теперь, когда ваш шприц заблокирован и заряжен, вы почти готовы к проведению инъекции!

Прежде чем начать, важно вооружиться соответствующими средствами индивидуальной защиты, включая перчатки. Правильное обращение с животными также имеет важное значение и немного варьируется в зависимости от используемого места инъекции.

Для подкожных инъекций, которые часто нацелены ниже дермы шеи животного, мышей сдерживают с помощью «загривки». Сначала держите животное за хвост и позвольте ему схватиться за крышку клетки. Затем крепко возьмитесь за загривок, подняв шатер из кожи на плечи животного.

Игла должна быть вставлена в основание тентовой кожи, и средство должно быть выведено с сильным, постоянным давлением на поршень. Введенная жидкость будет медленно всасываться в кровоток.

Внутрибрюшинные инъекции в полость тела всасываются со скоростью, аналогичной приему внутрь. Чтобы получить доступ к животу, переверните потрепанное животное и надежно заправьте хвост под мизинец.

Затем мысленно разделите брюшную полость животного на 4 квадранта и вставьте иглу в нижний левый или правый квадрант. Надавите на поршень с сильным постоянным давлением, чтобы подать до нескольких сотен микролитров средства. В качестве альтернативы, внутривенные инъекции позволяют более эффективно, системно вводить экспериментальный агент.

Внутривенные инъекции чаще всего выполняются в хвостовые вены. Сначала мышей согревают под тепловой лампой в течение нескольких минут, что вызывает набухание вен и облегчает введение иглы. Чтобы мышь оставалась устойчивой во время инъекции, поместите ее в пластиковый ограничитель, просунув хвост через специальное отверстие в задней части.

Определение правильного сосуда является обязательным условием для успешной внутривенной инъекции. Обязательно найдите одну из двух хвостовых вен по обе стороны от хвоста; а не артерия на нижней стороне хвоста.

Придерживая иглу скошенной стороной вверх, введите ее в вену. Если игла размещена правильно, инъекция приведет к изменению цвета вены с темно-синего на бледно-белый по мере продвижения агента по сосуду.

После каждой инъекции выбрасывайте иглу в контейнер для биологически опасных острых предметов без повторной обработки. Никогда не используйте иглу повторно, так как кончики могут затупиться и нанести травму мыши.

Теперь, когда вы знакомы с распространенными методами инъекции, давайте рассмотрим некоторые практические применения доставки экспериментальных агентов.

Во многих экспериментах мышей заражают определенным патогеном для изучения прогрессирования заболевания, а также взаимодействия хозяина и патогена. Например, подкожные инъекции устойчивых к антибиотикам бактерий вызывают поражения, размер которых является показателем вирулентности возбудителя. В качестве альтернативы, инъекции в подушечку стопы могут быть использованы для визуализации рекрутинга иммунных клеток в месте инфекции в реальном времени.

Мышиные модели также полезны для изучения прогрессирования рака и терапии. Для создания этих моделей можно использовать инъекции, чтобы быстро и эффективно индуцировать злокачественные новообразования у мышей, как путем доставки канцерогенных соединений, так и имплантации раковых клеток в ткани хозяина.

Однако для доставки агента не всегда требуется инъекция. Интраназальная инокуляция, например, может быть использована для введения в легкие агента, представляющего интерес, для имитации и изучения прогрессирования респираторных заболеваний. Другой способ, зондирование, позволяет вводить препарат непосредственно в желудок, чтобы обеспечить точную дозировку, недостижимую при обработке на основе пищи или воды.

Вы только что посмотрели обзор JoVE о введении экспериментальных агентов в мышь. В этом видео мы рассмотрели факторы, которые следует учитывать при выборе экспериментального агента, инструменты и стратегии для инъекций мышей, а также некоторые области применения этих критически важных методов. Спасибо за просмотр!