Введение экспериментальных агентов в организм мыши

Многие эксперименты основаны на введении различных препаратов мышам. Часто эти вещества вводят для изучения их влияния на биологический процесс. Кроме того, препараты могут играть важную роль в подготовке животных к эксперименту. В этом видео мы обсудим важные аспекты введения экспериментальных агентов, инструменты для их доставки, некоторые конкретные пути введения и области применения этих основных методов.

Итак, какие факторы необходимо учитывать при планировании введения экспериментального препарата?

Первым является подбор подходящей дозы. Обеспечение правильной дозировки препарата, которая обычно рассчитывается в зависимости от веса животного, имеет решающее значение.

Также важно учитывать путь введения. Выбор одного из многих доступных путей введения будет зависеть от таких свойств, как вкусовые качества препарата, его вязкость, объем вводимого вещества, целевая ткань и требуемая скорость распространения. В данном видео мы сосредоточимся на инъекциях, которые являются одним из наиболее эффективных методов доставки препарата.

Прежде чем обсуждать технику выполнения инъекции, ознакомимся с основными инструментами, необходимыми для этой процедуры.

Начнем со шприца. Жидкости удерживаются в цилиндре, который имеет разметку для точного измерения объема. Поршень плотно прилегает к цилиндру и используется для перемещения его содержимого. Наконец, кончик шприца является местом крепления основания иглы. На противоположном конце стержня иглы находится скошенный кончик. Будьте осторожны, он очень острый!

Основания игл имеют цветовую кодировку, соответствующую их размеру, или «гейджу» (gauge), при этом более высокие значения гейджа указывают на меньший диаметр иглы. Размер иглы выбирается в зависимости от желаемого пути введения: чем меньше или чувствительнее область, тем более тонкая игла требуется.

Выбрав подходящую иглу и шприц для вашего эксперимента, наберите препарат в цилиндр, оттягивая поршень назад. Пузырьки воздуха, введенные вместе с препаратом, могут повредить ткани и нанести вред подопытному животному. Поэтому переверните шприц и осторожно постучите по цилиндру, чтобы все пузырьки переместились к кончику и вышли наружу. По возможности выдавите излишек препарата, чтобы убедиться, что пузырьки воздуха полностью удалены.

Теперь, когда шприц заправлен и готов, вы почти готовы выполнить инъекцию!

Перед началом работы важно использовать соответствующие средства индивидуальной защиты, включая перчатки. Также крайне важен правильный захват животного, который немного различается в зависимости от места введения препарата.

Для подкожных инъекций, которые часто проводятся под дерму в области шеи животного, мышей фиксируют методом «захвата за загривок» (scruffing). Сначала удержите животное за хвост и дайте ему уцепиться за крышку клетки. Затем крепко захватите кожу на загривке, создавая кожную складку в области плеч животного.

Иглу следует вводить в основание кожной складки, вводя препарат путем плавного и равномерного нажатия на поршень. Введенная жидкость будет медленно всасываться в кровоток.

Интраперитонеальные инъекции в полость тела всасываются со скоростью, близкой к скорости всасывания при пероральном приеме. Чтобы получить доступ к брюшной полости, переверните зафиксированное животное и надежно зажмите хвост мизинцем.

Затем мысленно разделите брюшную полость животного на 4 квадранта и введите иглу в нижний левый или правый квадрант. Плавно и равномерно нажмите на поршень, чтобы ввести до нескольких сотен µL препарата. В качестве альтернативы, внутривенные инъекции позволяют более эффективно и системно доставить экспериментальный агент.

Внутривенные инъекции чаще всего выполняются в хвостовые вены. Сначала мышей в течение нескольких минут прогревают под тепловой лампой, что вызывает расширение вен и облегчает введение иглы. Чтобы мышь оставалась неподвижной во время инъекции, поместите ее в пластиковый фиксатор, пропустив хвост через специальное отверстие сзади.

Для успешного выполнения внутривенных инъекций крайне важно правильно идентифицировать сосуд. Убедитесь, что вы нашли одну из двух каудальных вен по бокам хвоста, а не артерию, расположенную на нижней стороне хвоста.

Держите иглу срезом вверх и введите ее в вену. При правильном расположении иглы в ходе инъекции цвет вены изменится с темно-синего на бледно-белый по мере продвижения препарата по сосуду.

После каждой инъекции утилизируйте иглу в контейнер для биоопасных острых предметов, не надевая колпачок обратно. Никогда не используйте иглу повторно, так как кончики могут затупиться и травмировать мышь.

Теперь, когда вы ознакомились с распространенными методами инъекций, рассмотрим некоторые практические аспекты введения экспериментальных агентов.

Во многих экспериментах мышей заражают определенным патогеном для изучения прогрессирования заболевания, а также взаимодействий между хозяином и патогеном. Например, подкожные инъекции антибиотикорезистентных бактерий вызывают образование очагов поражения, размер которых служит показателем вирулентности патогена. Кроме того, инъекции в подушечку лапы могут использоваться для визуализации в реальном времени процесса привлечения иммунных клеток в очаг инфекции.

Мышиные модели также полезны для изучения прогрессирования рака и методов его терапии. Для создания таких моделей инъекции могут применяться для быстрого и эффективного индуцирования злокачественных новообразований у мышей как путем введения канцерогенных соединений, так и путем имплантации раковых клеток в ткани хозяина.

Однако для доставки агента инъекции требуются не всегда. Например, интраназальная инокуляция может использоваться для введения исследуемого агента в легкие с целью имитации и изучения прогрессирования респираторных заболеваний. Другой способ, зондовое кормление (гаваж), позволяет вводить агент непосредственно в желудок, что обеспечивает точную дозировку, недостижимую при введении через корм или воду.

Вы только что посмотрели обзор JoVE по введению экспериментальных агентов мышам. В этом видео мы рассмотрели факторы, которые следует учитывать при выборе экспериментального агента, инструменты и стратегии проведения инъекций мышам, а также некоторые варианты применения этих важнейших методов. Спасибо за просмотр!