Влияние Мужской аксессуар железы Продукты на откладки яиц в брюхоногих моллюсков

Общая цель данного протокола состоит в том, чтобы охарактеризовать влияние белков семенной жидкости на поведение при откладывании яиц одновременным видом гермафродитов. Это достигается путем первичной изоляции индивидуумов от стандартизированной лабораторной культуры, а затем препарирования органов-мишеней. Во-вторых, сперматозоиды собираются и делается лечебный раствор.

После этого улиток осеменивают искусственно. Затем они помещаются в биоэссе. В стандартных условиях яйцевые массы собирают, сканируют и помещают в отдельные БС для вылупления.

Через несколько недель птенцов подсчитывают и сканируют, после чего все снимки можно анализировать с помощью бесплатного программного обеспечения. Этот протокол может помочь ответить на вопросы о процессах полового отбора, которые опосредованы белками семенной жидкости. Поскольку мы рассматриваем здесь одновременных гермафродитов, мы также можем рассмотреть, протекают ли эти процессы одинаково или по-разному, как они протекают у отдельных половых видов.

Для этого протокола мы использовали замечательный IL in les, который мы поддерживаем в Свободном университете в Амстердаме. Мы используем этот вид для изучения вопросов полового отбора и размножения. У гермафродитов, из-за его относительно большого размера тела, он экспериментально очень доступен.

Кроме того, поскольку он используется во многих различных биологических дисциплинах в качестве модельного вида, мы знаем много о базовой биологии этих животных. Меня зовут Юми. Я кандидат наук на кафедре экологических наук.

В полном университете я продемонстрирую следующие протоколы. Давайте начнем. Для выполнения надежной биозы чаще всего используется лабораторная культура, чтобы исключить скрытые переменные.

Вода с низким содержанием меди поддерживается на уровне 20 градусов по Цельсию, а светлый темный цикл составляет 12 на 12 часов. В Свободном университете лабораторная культура хранится в резервуарах для разведения с непрерывным водообменом. В стандартных условиях взрослых улиток кормят салатом при либидо и разделяют в соответствии с их возрастным классом.

После того, как улитки будут удалены из питомника, они будут считаться использованными и не могут быть возвращены в резервуары для разведения. Перед началом процедуры вам понадобится стереомикроскоп, препарирующая пластина с булавками, небольшие хирургические ножницы, щипцы, шприц, наполненный раствором хлорида магния, и несколько бумажных полотенец, чтобы усыпить улитку, проникнуть в стопу с помощью инъекционной иглы под углом 45 градусов и мягко непрерывно надавливать, пока улитка не расслабится и не останется вытянутой. Извлеките иглу для инъекций и убедитесь, что улитка усыплена.

Далее возьмите щипцы и аккуратно снимите оболочку. Следуя за кривизной наполовину, аккуратно соскребите улярную мышцу с раковины. Затем аккуратно выкрутите улитку из раковины, следуя за направлением намотки раковины.

Теперь улитка была извлечена из своей раковины и раковину можно выбросить. Затем поместите улитку на пластину для вскрытия и вставьте булавку через задний конец ножки. Затем поместите булавку через головку.

Натяните улитку и вставьте булавку в тарелку. Теперь улитка готова к вскрытию. Включите индикатор стереомикроскопа и отрегулируйте микроскоп.

Перед тем, как сделать первый разрез, важно локализовать женскую пору. В дальнейшем это будет точкой отсчета. Сделайте первый надрез прямо под краем мантии и разрежьте по направлению к женскому пору.

Сделайте оборот вокруг бонно пор по направлению к голове. Следите только за тем, чтобы резать кожу и не задеть ни один орган и резать по прямой линии. Для этого исследования мы будем препарировать предстательную железу и семенные пузырьки для семенной жидкости и сперматозоидов соответственно.

Обратите внимание, что для полного запаса спермы и семенной жидкости улиток следует изолировать в течение одной недели с помощью кормления до либидо. Вскрытие происходит так же, как описано ранее. Семенные пузырьки расположены в задней части тела животного.

Далее предстательная железа будет подвешена в физрастворе и помещена на лед. В дальнейшем. Они будут смешаны с лечебными растворами.

Перед интравагинальной инъекцией собранная сперма будет добавлена в семенную жидкость или отдельные белки в соответствующей дозе. Для этой методики искусственного оплодотворения вам понадобится одномиллилитровый шприц, содержащий тестовый раствор, установите иглу для инъекций на шприцы, убедившись, что в шприцах для инъекции нет пузырьков, осторожно используйте силиконовую трубку. Наденьте силиконовую трубку на иглу для инъекций.

Убедитесь, что трубка проколота, и удалите воздух из трубки. Перед инъекцией улитку необходимо успокоить. Это будет следовать тому же протоколу, что и во второй главе.

Улитке дадут дозу от двух до трех миллилитров 50 микромоляров хлорида магния. Когда улитка будет должным образом успокоена и расслаблена, уложите ее в форму, чтобы она оставалась в устойчивом положении. Далее возьмитесь за конец силиконовой трубки парой тонких щипцов и аккуратно введите его в женский пор.

Затем аккуратно надавите на шприц и осторожно введите заданный объем исследуемого раствора. Подождите полминуты, чтобы давление в трубке распространилось на женский орган. После этого аккуратно извлеките трубку и поместите улитку в свою специфическую емкость.

Ведь улитки были искусственно оплодотворены. Их можно транспортировать в их экспериментальные резервуары и начать биоанализ биоса. Улитки восстановятся после седации через несколько часов. Биопробы.

Что касается полового отбора, эксперименты обычно занимают две недели, прежде чем можно будет начать биозу. Важно поместить всех особей в отдельные контейнеры и промаркировать их. Далее измерьте длину панциря каждой улитки.

Это хороший показатель их размера, который может оказать влияние на сексуальное поведение. После этого улиток помещают в экспериментальный аквариум. В этом резервуаре действуют те же стандартные условия, что и в питомнике.

Как обсуждалось в первой главе, важно разместить контейнеры в правильной ориентации, чтобы отверстия следовали за потоком воды в резервуаре. Во время биопроб улиток необходимо регулярно кормить. Стандартное количество листовых дисков салата нарезается с помощью дырокола по металлическим отверстиям.

Достаточная дозировка – два диска через день. С модельным видом, lumia stauss, улиток следует проверять на наличие яйцевых масс через день. Эти яичные массы будут собраны для проведения измерений.

Для сканирования яиц вам понадобится ноутбук, содержащий драйвер сканера, планшетный сканер, стандартную миллиметровую шкалу, ложку для переноса яичной массы и стеклянные пластины для укладки поверх яичной массы. Для начала возьмите ложку и соскребите яичные массы со стенок емкости. Непрозрачные яичные массы только что были отложены и не могут быть использованы.

В этом измерении поместите яичные массы на передаточные пластины и повторяйте эти действия, пока пластины не заполнятся. После этого выложите яичные массы на стеклянные плитки в том же порядке, что и перекладываем пластины. Яичные массы прилипнут к стеклянной плитке, перевернут ее вверх дном и аккуратно положат на планшетный сканер чуть ниже весов.

Затем надавите на пластины, чтобы раздавить яичные массы. При этом уже сейчас добавятся все яйца, чтобы они были просканированы одинаково хорошо. Перед сканированием рекомендуется отрегулировать настройки для достижения наилучшего результата.

Для сканирования важно отрегулировать разрешение до максимума, чтобы сделать предварительный просмотр скана Чтобы впоследствии обрезать рабочую область, и, наконец, отрегулировать яркость и контрастность перед совершением окончательного сканирования. После сканирования яйцеклетки будут помещены в пробирки с собственной маркировкой для созревания и вылупления. Вода в этих флаконах обновляется через день, чтобы поддерживать уровень кислорода на должном уровне.

По мере того, как вылупляется все больше улиток, следует использовать различные методы для освежения воды. Лучший порядок – сначала вылить или перелить, а затем откачать воду с помощью пипетки с открытым изображением электронной таблицы JA. Чтобы сначала записать данные и фотографию из изображения J, используйте инструмент масштабирования для перехода к миллиметровому масштабу.

Увеличьте масштаб и отрегулируйте окно так, чтобы экран заполнялся на один миллиметр. Проведите линию с помощью инструмента «Линия» между двумя линиями-индикаторами. Затем перейдите к анализу, затем установите масштаб.

Во всплывающем меню вы увидите, как Измеренная длина регулирует известное расстояние до единицы и единицу измерения до миллиметров. Поставьте галочку в поле global и закройте окно. Теперь, когда масштаб установлен, мы можем увеличить масштаб к первым массам яиц до 800%.Используйте эллиптический инструмент, чтобы нарисовать окружность яиц.

Нажмите D, чтобы нарисовать окружность. Это поможет предотвратить двойное измерение одного и того же яйца. Нажмите M, чтобы измерить окружность.

После того, как будет собрано достаточное количество данных, появится всплывающее окно. Окно данных можно сохранить в виде файла Excel. Данные также могут быть скопированы непосредственно в лист.

Если предпочтительные измерения не отображаются во всплывающем окне, это можно настроить и проанализировать. Заданные измерения, подсчет отдельных яиц в массе яйца также может быть выполнен с помощью плагина счетчика ячеек. Перейдите к плагинам.

Затем проанализируйте и выберите счетчик ячеек. Появится окно счетчика ячеек. Установите флажок «Сохранить оригинал» и нажмите «Инициализировать».

Появилось новое окно счетчика. Выберите инструмент «Крестик здесь» на панели инструментов. Затем выберите тип счетчика в меню счетчика ячеек.

При нажатии в окне счетчика ячеек яйца будут подсчитаны. Общее количество можно найти рядом с типом счетчика в меню счетчика ячеек. Множественные массы яиц можно подсчитать с помощью счетчика клеток.

Типы счетчиков можно добавлять и удалять при желании, это число необходимо вручную скопировать в электронную таблицу или нажать на результаты, после чего появится всплывающее окно. Показ всех результатов. С помощью этого метода мы показали, как собирать белки семенной жидкости, как их осмысленно проверять.

Мы показали это на примере полного экстракта предстательной железы, но, конечно, отдельные белки семенной жидкости могут быть протестированы таким же образом. Кроме того, есть возможность посмотреть на другие процессы и яйцекладки. Результаты наших экспериментов показали, что существует единственный белок семенной жидкости, называемый статином avios, который опосредует уменьшение яйцеклетки.

Кроме того, мы обнаружили, что перенос семенной жидкости увеличивает размер или столбы. Статин является первым полностью охарактеризованным белком семенной жидкости у одновременного гермафродита. В то время как о воздействии семенной жидкости часто сообщалось у видов с раздельным полом, наши результаты подчеркивают, что семенные жидкости не менее важны и у гермафродитов.