Мышиный Эндоскопия для В Vivo Мультимодальные изображений канцерогенеза и оценки кишечной заживления ран и воспаления

В этом видео будут представлены различные области применения нейронной эндоскопии в первом приложении. Как использовать эндоскоп для оценки тяжести заболевания на мышиной модели колита, будет показано во втором приложении. Использование эндоскопии для контроля заживления раны слизистой оболочки in vivo будет продемонстрировано в последнем приложении.

Использование флуоресцентной эндоскопии для обнаружения опухолей кишечника и техника внутрислизистого введения агентов в конечном итоге будут представлены для заживления кишечных ран, воспаления и рака. Агенезия может быть оценена на основании результатов эндоскопического анализа. Основное преимущество этой методики перед существующими методами, такими как гистологический анализ экспериментального колита, заключается в том, что с помощью этой методики можно проводить индивидуальные контрольные обследования и многократно оценивать изменения слизистой оболочки.

Таким образом, этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области экспериментального воспаления кишечника, например, каково временное установление колита. Применение этого метода распространяется на терапию колоректального рака из-за возможности функционально охарактеризовать опухолевые поражения. Хотя этот метод может дать представление о развитии колоректального рака, он также может быть применен к другим системам, таким как воспалительное заболевание кишечника или инфекционный колит.

Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, испытывают трудности из-за сложности работы с малогабаритным эндоскопом флуоресценции. Эндоскопия расширяет возможности широкосветной эндоскопии до молекулярной визуализации за счет специфического нацеливания на клеточные структуры флуоресцентно меченых следов во время эндоскопических исследований. Чтобы вызвать колоректальный рак у экспериментальных животных, сначала используйте одномиллилитровый шприц, оснащенный иглой 30 калибра, для межбрюшинного введения 10 миллиграммов на килограмм свежеприготовленного мутагенного метана в каждую мышь.

Испытайте экспериментальную группу мышей с помощью повторяющихся циклов 3% массы на объем, декстрана сульфата натрия или DSS с нулевого по 7-й день с 21 по 28 и с 42 по 49-й день, чтобы вызвать воспалительный колоректальный рак. Agenesis снабжала мышей водой из автоклава в промежутках между испытаниями в день колоноскопии. После подтверждения седации путем щипкования пальцев ног используйте канюлю на пуговицах, чтобы закинуть два миллилитра жидкой клизмы в толстую кишку подопытного животного.

Если подозревается значительная каловая нагрузка, то в ожидании дефекации мыши подключите к блоку камер для эндоскопии белого света ветеринарную эндоскопическую рабочую станцию небольшого животного. Настройте параметры источника света для возбуждения вводимых трасс, а затем интегрируйте соответствующий полосовой фильтр между телескопом и камерой. Теперь поместите мышь на смотровой стол и очень осторожно вставьте эндоскоп.

Во избежание перфорации откройте оба клапана оболочки. К воздушному насосу должен быть подключен один клапан. Другой должен быть закрыт указательным пальцем для контроля воздуха.

Затем медленно и осторожно надувайте толстую кишку, продвигая эндоскоп только до правого сгибателя толстой кишки, чтобы избежать перфорации примерно в 4,5 сантиметрах от анального отверстия. Теперь медленно потяните эндоскоп назад и осмотрите слизистую оболочку на предмет воспалительных или злокачественных изменений, а также оцените всю окружность кишечника. Затем, чтобы получить образец биопсии, осторожно введите биопсийные щипцы через рабочий канал до тех пор, пока кончик щипцов не будет виден на мониторе.

Осторожно открывайте и закрывайте щипцы во избежание перфорации и перемещайте их к месту патологии. Для применения фармакологических средств на слизистую оболочку предварительно заполните гибкую инъекционную трубку полностью интересующим средством, а затем протолкните трубку через рабочий канал до тех пор, пока канюля не станет видна на мониторе. Затем приложите тонкий шприц и введите иглу в подслизистую оболочку под углом от 15 до 30 градусов лицом к скосу в направлении слизистой, аккуратно введите до 50 микролитров лечебного средства.

После успешной инъекции слизистая оболочка демонстрирует характерный лифтинг для проведения флуоресцентной эндоскопии, внутривенного введения интересующего препарата перед обследованием. Проверьте оптимальный промежуток времени между введением флуоресцентно меченного индикатора и процедурой визуализации, который зависит от фармакологии индикатора. Затем для просмотра введенного агента с помощью флуоресцентной эндоскопии настройте параметры системы полосового фильтра в соответствии с длинами волн возбуждения и излучения вводимого индикатора.

Наконец, визуализируйте ткань после применения индикатора, чтобы получить показания соотношения цели к фону после индукции колита. Мышей. Демонстрируйте потерю веса, начиная с третьего дня с максимальной потерей массы тела на 19%, происходящей на седьмой день в соответствии с потерей массы тела. Нейроэндоскопический индекс тяжести колита увеличивается на седьмой день после начала DSS, что указывает на массивное воспалительное повреждение слизистой оболочки толстой кишки, которое уменьшается к 13-му дню.

Также на седьмой день, после начала DSS, гистологические повреждения значительно выше у мышей, получавших DSS, по сравнению с контрольной группой, что отражается в денудации эпителия, изъязвлениях слизистых оболочек и повышенной инфильтрации нейтрофилов, все из которых значительно улучшаются к 13-му дню. На этих репрезентативных изображениях, полученных при обычной эндоскопии, раны слизистых оболочек были индуцированы механически с помощью миниатюрных биопсийных щипцов с раной диаметром в один миллиметр. Затем заживление контролировалось с помощью ежедневного эндоскопического обследования и количественно оценивалось путем измерения остаточной площади раны с помощью программного обеспечения для редактирования изображений.

Закрытие индивидуальной области раны с течением времени выражалось отношением фактической площади раны к исходной площади раны. Например, на третий день после образования раны был восстановлен 41% площади раны, тогда как через семь дней рана полностью зажила. Как обычно, в конце эксперимента раны могут быть резецированы для гистологической оценки, X vivo, как на этих репрезентативных изображениях окрашенного гематина и ESN раневого ложа на нулевой и пятый день, примерно через 80 дней после индукции опухоли оксидметаном и трех циклов множественных опухолей толстой кишки DSS, а также могут наблюдаться макроскопические признаки хронического воспаления, такие как гранулированная слизистая оболочка.

Эндоскопическая флуоресцентная эндоскопия нейронов кишечника без применения индикатора приводит к отсутствию обнаружения какого-либо специфического сигнала, при этом не наблюдается взаимодействий с тканью толстой кишки или фекальной аутофлуоресценции. Напротив, сразу после внутривенного введения Фитц Декстрана флуорохром может наблюдаться на слизистой оболочке толстой кишки и может быть использован для оценки повышенной васкуляризации в областях хронического воспаления или злокачественной слизистой оболочки. Соответственно, количественная оценка интенсивности флуоресценции может быть использована для измерения значительно повышенного поглощения флуорохрома в злокачественной ткани по сравнению с непораженной слизистой оболочкой толстой кишки.

После освоения этой техники ее можно выполнить за пять-10 минут, если она выполнена правильно. Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить о том, что жесткий эндоскоп должен осторожно продвигаться через морскую ободочную кишку. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как оценить заживление эпителиальных ран, воспаление кишечника и агенезию рака при выполнении морской колоноскопии.