Выращивание клетках млекопитающих с использованием одноразовых Пневматический биореактора системы

Общая цель этой процедуры заключается в выращивании большого количества клеток млекопитающих. Это достигается путем предварительной калибровки pH и растворенного кислорода или зондов, а затем автоклавирования pH, зондов do и втулки температурного зонда. Второй шаг заключается в том, чтобы вставить зонды и втулку в сосуд, а также расположить сосуд на биореакторе и подключить выхлопные трубы, фильтр, газовые магистрали и температурный зонд.

Следующим шагом является подключение кабелей растворенного кислорода и рН и асептическое соединение среды и микроносителей, которые закачиваются в биореактор. Последним шагом является запуск контроллеров, чтобы убедиться, что биореактор достигает желаемой скорости вращения рабочего колеса, температуры и насыщения кислородом. В конечном итоге, после инокуляции и компьютерного мониторинга, культура может быть переработана для экстракции и очистки нужного продукта.

Основное преимущество этого метода по сравнению с существующими методами, такими как многоразовый биореактор с перемешивающим резервуаром, заключается в том, что биореактор с воздушным колесом прост в использовании и сводит к минимуму вероятность микробного загрязнения. Давайте начнем. Чтобы начать работу по протоколу, войдите на экран приветствия.

Затем осмотрите датчик pH и убедитесь, что наконечник датчика заполнен раствором электролита. Приобретите один стакан с раствором pH четыре, другой стакан с раствором pH семь и бутылку для мытья с дистиллированной водой. Затем подключите кабель pH к датчику pH.

Перейдите на вкладку действий в интерфейсе hello, выберите калибровать. Затем выберите вкладку PHA и двухточечную калибровку. Введите температуру буфера в поле температуры калибровочного раствора.

Поместите датчик в раствор pH four для калибровки Введите значение в нулевое поле. Как только график стабилизируется, нажмите, откалибруйте и промойте датчик pH дистиллированной водой. Повторите калибровку для pH семь и сохраните настройки.

Введите значение buffer в поле span и дождитесь, пока привой стабилизируется. Для начала растворите кислород или проведите калибровку. Убедитесь, что датчик растворенного кислорода подключен к системе в течение нескольких часов и поляризован на вкладке калибровки, выберите DOA и двухточечную калибровку.

Отсоедините датчик растворенного кислорода. Введите ноль на вкладке нуля и подождите, пока график стабилизируется. Прежде чем выбрать калибровку, повторно подключите датчик do и введите 100 в поле span

Когда график стабилизируется, нажмите кнопку «Калибровать два». Затем сохраните настройки и закройте программу. После калибровки поместите датчики и термоколодец в пакеты для автоклава и откройте их в течение 30 минут при температуре 121 градус Цельсия и 15 фунтов на квадратный дюйм.

После окончания работы автоклава продезинфицируйте пакеты автоклава 70% изопропиловым спиртом и перенесите пакеты в шкаф биологической безопасности или БСК. Продезинфицируйте и введите сосуд с реагентом в БСК. Снимите внутреннюю упаковку и осмотрите сосуд и трубки на наличие повреждений.

Затем установите датчик растворенного кислорода в передний левый порт емкости с реагентами и термоскважину в задний левый порт. Установите датчик pH в правый передний порт для установки. Откройте колпачок датчика и слегка вденьте его в порт на крыше судна.

Затем переведите судно из ССК. Убедитесь, что кабели датчиков pH и растворенного кислорода находятся снаружи рукава сосуда и внутри него ничего не находится. Держите сосуд лицом к передней части и вставьте сосуд ножками вперед в рукав.

Убедитесь, что дно сосуда упирается в обогреватели. Затем аккуратно вмонтируйте датчик температуры в сосуд термостат. Колодец. Далее извлеките из сумки наборы трубок.

Сопоставьте цветовую маркировку на трубке с соответствующими разъемами и насосами на блоке управления биореактором. Проложите линии подачи и отбора проб фильтрующего материала за датчиком растворенного кислорода и тепловым фильтром. Вставьте трубку в насос с цветовой кодировкой с левой стороны биореактора.

Подсоедините магистральные и микрогазопроводы. Запрессуйте разъем главной газовой магистрали в ее газоотводное отверстие, чтобы установить основную газовую линию. Затем поверните соединитель микрогазопровода по часовой стрелке в его газоотводное отверстие, чтобы установить микрогазопровод.

Чтобы установить трубку фильтрующей печи, откройте ее и закрепите трубку вытяжного фильтра на крыше. Убедитесь, что трубка проходит через два крючка к фильтру и выходит из духовки. Проведите нижнюю линию через крючок на дне фильтрующей духовки и закройте дверцу.

Затем подключите кабели к датчикам растворенного кислорода и pH. После завершения установки сформируйте стерильное соединение с помощью фитингов для приманки между неиспользуемой линией среднего выпуска и источником среднего пакета для бутылок. Перейдите на вкладку действий в интерфейсе Hello.

Нажмите «Насосы управления», выберите «Насос носителя» и нажмите ползунок, чтобы включить насос для фильтрующего материала. Затем добавьте от 1,5 до 3,0 литров фильтрующего материала и нажмите ползунок, чтобы выключить насос. Теперь система готова к закачке в реактор заранее подготовленных микроносителей.

Они могут быть добавлены с помощью строки сложения. Прикрепите бутылку MICROCAR к соответствующей линии присоединения с помощью стерильного замка для приманки. Включите насос сложения на экране насоса управления.

После добавления микроносителей выключите помпу с помощью ползунка, вернитесь на главный экран в интерфейсе hello, выберите действия, а затем дополнительно. Выберите подходящий контроллер для редактирования настроек. Установите контроллеры в автоматический режим и введите заданные значения.

После настройки контроллеров включите воздушный насос. Загляните внутрь сосуда с реагентом, чтобы убедиться, что воздушное колесо вращается. Убедитесь, что датчик растворенного кислорода полностью поляризован и что значение растворенного кислорода стабилизировалось.

Затем откалибруйте форму датчика do, стерильное соединение между неиспользуемой линией добавления среды, обозначенной одной оранжевой полосой, и источником пакета для бутылок с клеткой с помощью фитингов для приманки. Затем установите силиконовую секцию трубки в насос для фильтрующего материала. Убедитесь, что зажим для трубки открыт, а зажим для разветвленных трубок закрыт.

Перейдите на вкладку насоса управления и включите насос для фильтрующего материала. Добавьте элементы и выключите насос для фильтрующего материала. После прививки перейдите на вкладку действий и выберите «Взять образец».

Убедитесь, что пробоотборная трубка находится в пробоотборном насосе, и управляйте краном для отбора проб в соответствии с инструкциями на экране. Извлеките шприц с образцом для подсчета клеток и других последующих приложений выполните подсчет клеток. Наконец, когда клетки достигают желаемой плотности от 1,2 до 10 до шести клеток на миллилитр, септически добавляют вирусный инокулюм в 20-миллилитровый шприц

Подсоедините шприц к запасному порту добавления на реакторе. Используйте экран контрольного насоса, чтобы включить дополнительный насос и добавить вирусную инокулянтию. Большинство клеток А5 49 прилипли к микроносителям в течение двух часов.

Через 12 часов клетки продемонстрировали признаки сплющивания и распространения на поверхности микроавтомобиля. К 24 часам микроносители демонстрировали равномерное распределение клеток. Колонизация микроавтомобилей происходит быстро, как показано здесь.

Процент колонизации микроавтомобилей 54 9 клетками составляет 75% к 24 часам. На этом графике показано количество жизнеспособных 54 9 клеток в культуре до и после инфицирования аденовирусом. Клетки продолжают расти экспоненциально до 1 миллиона клеток на миллилитр через 48 часов.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как собрать и эксплуатировать биореактор с воздушным колесом для выращивания клеток млекопитающих с высокой плотностью для производства клеток или белков. Спасибо за просмотр и удачи в ваших экспериментах.