2 октября 2014 г.
Экспериментальная модель субарахноидального кровоизлияния (САК) с контролируемым внутричерепным давлением у кролика сочетает в себе стандартные процедуры — канюляцию подключичной артерии и чрескожную большую пункцию цистерны, что позволяет точно имитировать патофизиологические состояния человека после САК. Мы представляем пошаговую инструкцию и обсуждаем ключевые хирургические моменты для успешного экспериментального создания САК.
Общая цель этой процедуры заключается в установлении независимой от обследования модели внутричерепного давления, или управляемого ВЧД шунта крови, острого субарахноидального кровоизлияния или модели САК у кролика. Это достигается путем предварительного канюлирования подключичной артерии. На втором этапе проводится цифровая субтракционная ангиография, а затем на заключительном этапе помещаются зонды нейромониторинга и игла спинального доступа.
Игла спинального доступа и подключичная артерия соединены с шунтом для индукции острого САК, независимого ВЧД, контролируемого острым САК, в конечном счете, можно контролировать мозговой кровоток ВЧД или ОАК, а также кардиореспираторную реакцию животного на острую САК. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области нервно-сосудистых заболеваний, например, как ранняя травма головного мозга и задержка формирования образца мозгового сосуда способствуют исходу и смертности от опороса. После аневризматического субического кровоизлияния: Начните с того, что положите кролика в лежачее положение на спине, зафиксировав передние и задние ноги на рабочей поверхности.
Установите трехканальную электрокардиограмму как таковую. Поместите три подкожных электрода треугольной формы на брюшную сторону кролика. Далее продезинфицируйте кожу повидон-йодом или аналогичным над правой живописной мышцей вокруг средней трети ключицы, накройте животное стерильными листами.
После инфильтрации грудной мышцы местными анестетиками сделайте боковой парамозный разрез кожи и обнажите грудную мышцу. Расщепляйте мышечное волокно сверху и снизу путем тупого рассечения до тех пор, пока подключичная артерия не будет визуализирована. Затем под микроскопом рассеките подключичную артерию с помощью двух прямых микрощипцов, а затем перевязайте ее дистально и наложите лигатуру вокруг обнаженного проксимального конца с помощью четырех О-полифиламентных швов и изогнутых микрощипцов.
Затем с помощью изогнутых микроножниц надрежьте стенку подключичной артерии и канюлируйте артерию ретроградно. Затем закрепите катетер лигатурой с двойным узлом по направлению к проксимальному отделу лигатуры, а также дополнительно закрепите катетер лигатурой с двойным узлом по направлению к дистальному отделу лигатуры, чтобы предотвратить перекручивание или изгиб проксимальных отделов артерии, а также избежать соскальзывания или массивного кровотечения. Затем соберите образцы крови для анализа газов артериальной крови и постоянно контролируйте стандартные сердечно-сосудистые и респираторные параметры.
Поместите внешнее устройство для измерения размеров под углом нижней челюсти для калибровки ангиограммы и обеспечения точного сравнения апостериорных измерений исходного и последующего диаметра сосуда. Затем выполните ретроградное внутриартериальное болюсное введение неионного ВГД ИОЛ через канюлированную артерию и немедленно промойте канюлю физиологическим раствором, чтобы предотвратить окклюзию лестницы. После исходной цифровой субтракционной ангиографии переместите кролика в положение лежа, стараясь не манипулировать внутриартериальным катетером и не перемещать его.
Подключите мониторинг артериального давления и начните непрерывно контролировать стандартные сердечно-сосудистые и респираторные параметры, включая электрокардиограмму, артериальное давление, периферическое насыщение кислородом, углекислый газ на выдохе и температуру тела. Передача данных через аналоговый выходной интерфейс на аналоговый цифровой преобразователь и регистратор данных и их сохранение. Поместите голову в держатель под углом 30 градусов, направленным вниз, а затем продезинфицируйте кожу над головой и шеей повидон-йодом трижды по одной минуте каждый.
Накрыв новую операционную область стерильными листами, сделайте разрез кожи по средней линии. Вставьте небольшой хирургический ретрактор, чтобы сделать три круглые остеотомии в соответствии с внешними ориентирами черепа и откалибруйте зонды нейромониторинга. Установите наконечники для нейромониторинга межчерепного давления и межпаренхиматозного лазерного допплеровского кровотока и запечатайте отверстия бора костным воском, чтобы жидкость в черепе оставалась герметичной и чтобы обеспечить закрытое состояние черепа, чтобы поддерживать стабильное состояние I-C-P-C-P-P и MAP.
Затем введите детскую иглу спинального доступа 22 калибра 40 миллиметрового чрескожно в большую цистерну. Затем проведите иглой вниз по костному наружному затылочному выступу до тех пор, пока не будет обнаружен разрыв. Подтвердите правильное положение иглы, наблюдая за самопроизвольным капанием спинномозговой жидкости при наклоне головы кролика вниз под углом от 20 до 30 градусов в течение нескольких минут.
Теперь используйте наполненную кровью трубку для измерения давления, чтобы соединить иглу спинального доступа в большой цистерне с трехсторонним стопорным краном, прикрепленным к ранее катетеризированной подключичной артерии. Затем откройте шунтирующее соединение между подключичной артерией и большой грудиной CI, чтобы вызвать субарахноидальное кровоизлияние. После вскрытия шунта внутричерепное давление начинает повышаться до значений, близких к диастолическому артериальному давлению.
В это время поток в шунте прекращается, если межчерепное плато сохраняется более 10 секунд, или если давление самопроизвольно снижается, закрыть шунт после того, как межчерепное давление достигнет своего пика, удерживать иглу спинального доступа на месте до тех пор, пока давление не вернется в устойчивое состояние, близкое к исходным значениям. Наконец, удалите мозговой кровоток тонкой иглой и внутричерепными зондами. Заткните отверстия бора костным воском, затем используйте сульфат неомицина для тщательного орошения раны и наложения швов на кожу.
Сначала зашить кожу над отверстиями для бора. Затем после переположения кролика в лежачее положение и удаления катетера подключичной артерии зашить грудную мышцу и кожу. Описанная в этом отчете модель бешеного кровяного шунта САК приводит к раннему повреждению головного мозга в базальной коре гиппокампа и сосудистой сети головного мозга уже через 24 часа после травмы, вызывая характерное распределение крови.
Кроме того, эта модель запускает умеренную и тяжелую степени отсроченного церебрального вазоспазма на третий день. После индукции САК смертность от процедуры составляет примерно 20% из-за остановки дыхания или тяжелой брадикардии в момент острой САК, во время которой животные находятся под полной анестезией. С технической точки зрения, эта модель кровяного шунта позволяет проводить как независимую от врача, так и контролируемую индукцию САК.
Пытаясь провести эту процедуру, важно помнить о том, что нужно надежно закрепить эту субклавонную артерию, взять с собой отличный автомобиль и изменить положение животного, а также быть очень нежным и терпеливым во время иглоукалывания Cy Sternum.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
В данной статье представлен метод создания модели шунтирования крови с контролем внутричерепного давления для имитации острого субарахноидального кровоизлияния (САК) у кроликов. Эта процедура максимально точно воспроизводит патофизиологические условия, характерные для человека, что позволяет получить ценные данные об особенностях САК.
Надежные модели на животных, воспроизводящие как ранние, так и отсроченные последствия субарахноидального кровоизлияния (САК), имеют решающее значение для трансляционных нейроваскулярных исследований и доклинической валидации мишеней. Модель кровеносного шунта у кролика позволяет осуществлять независимое от оператора индуцирование САК с контролем внутричерепного давления (ВЧД), что обеспечивает воспроизводимость механистических исследований острого повреждения мозга и отсроченного вазоспазма. Данная модель восполняет критический пробел в процессе разработки препаратов, предоставляя надежную платформу для оценки патофизиологических механизмов и потенциальных методов терапевтического вмешательства.
Эта модель интегрируется в континуум от фундаментальных открытий до доклинических исследований, позволяя проводить исследования патофизиологии SAH на основе выдвинутых гипотез и тестировать методы терапевтического вмешательства.