Изображений Локальный ЦС 2+ Сигналы в культуре клетках млекопитающих

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы продемонстрировать получение, обнаружение и анализ локальных IP-опосредованных сигналов кальция в интактных клетках млекопитающих с использованием изображений на основе камер. Это достигается путем предварительного культивирования клеток на стеклянных посудах с нижней крышкой и загрузки их проницаемыми для клеточной мембраны формами флуоресцентного индикатора кальция. CAL пять 20 и клетка IP три.

Второй шаг заключается в том, чтобы поместить защитное стекло на предметное столико инвертированного микроскопа и осветить образец светом с яркостью 488 нанометров, чтобы возбудить чувствительный к кальцию флуоресцентный краситель Cal five 20. Затем индуцируются локальные кальциевые сигналы путем воздействия на клетки короткого импульса ультрафиолетового света. Эта фотография высвобождает IP 3 из заключенного в клетку предшественника таким образом, что он теперь может связываться с рецептором ацетолтрифосфата и опосредуть высвобождение кальция из эндоплазматического ретикулума.