Долгосрочный мониторинг Непрерывный ЭЭГ в малых грызунов Модели заболеваний человека с использованием системы Эпоха беспроводной передатчик

Общая цель этой процедуры заключается в том, чтобы эффективно имплантировать эпический передатчик для записи высококачественной ЭЭГ у грызунов, таких как крысы и мыши. Это достигается путем предварительного обнажения и сушки поверхности черепа. Вторым шагом является сверление отверстий в черепе для вставки передатчика, электродов и любых необходимых костяных винтов.

Далее вставляются костные винты и выравниваются электроды передатчика. Заключительным этапом является вставка электродов и крепление преобразователя к черепу с помощью акрилового клея. В конечном счете, программное обеспечение для сбора видеоданных и обзора используется для мониторинга активности ЭЭГ 24 7 для регистрации всех событий ЭЭГ, таких как судороги и межприступные всплески.

Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку этапы имплантации сложны для изучения. Размер черепа грызуна приводит к сложной, но поддающейся обучению хирургической процедуре. Основная цель данной презентации – упростить эту процедуру имплантации и сделать ее легко воспроизводимой.

Впервые идея этого метода пришла нам в голову, когда мы испытывали трудности с долгосрочными электрографическими записями с животных моделей эпилепсии. Во время судорожных припадков проводные записи подвержены электрическим артефактам и нежелательной нагрузке на границу раздела электрода черепа. Проводные системы записи могут выйти из строя из-за того, что животное грызет трос и царапает имплантат.

Эта беспроводная система решает все эти проблемы, обеспечивая непрерывную запись ЭЭГ в течение шести месяцев. При подготовке к операции обязательно полностью простерилизуйте трансмиттер, замочите его в 70% этаноле, промойте в стерильном физрастворе и погрузите в стерильный физиологический раствор. Оставьте его там до тех пор, пока он не понадобится.

Последняя подготовка заключается в том, чтобы убедиться, что все на месте операции стерилизовано. Распылите и протрите окружающую территорию и оборудование 70% этанолом. После обезболивания животного обязательно убедитесь в отсутствии реакции на ущипывание пальца ноги, прежде чем начинать операцию, пока животное находится под наркозом.

Делайте это каждые 15 минут. Животное, находящееся под наркозом, должно быть сначала зафиксировано в положении в стереотаксической раме. Используйте ушные планки, но не затягивайте их слишком сильно, так как кожа молодых щенков очень мягкая.

После закрепления наложите носовой конус, чтобы подать 3% изофтора. Чтобы согреть животное, держите под ним грелку при температуре 37 градусов по Цельсию. Для взрослых животных также смажьте глаза.

Теперь простерилизуйте место разреза Сначала очистите кожу головы 70% этанолом, а затем Бетадином, потрите кожу круговыми движениями. Затем драпируйте животное. Начните с того, что очень осторожно сделайте разрез на волосистой части головы, немного за ушами, по средней линии.

Удлините разрез примерно на два сантиметра. У молодых щенков очень мягкий череп. Кроме того, сделайте этот разрез всего в один разрез, чтобы он зажил быстрее.

Таким образом обнажают череп. Далее, используя зажимы для аневризмы, возьмитесь за череп и обнажите и высушите область, где будет прикреплен передатчик. Имейте в виду, что у молодых щенков кости черепа не срастаются.

Затем высушите череп в том месте, где будет прикреплен передатчик Для прочного адгезивного соединения используйте электрокаутерную ручку, чтобы остановить кровотечение на черепе. Теперь, используя анатомические ориентиры и атлас мозга, определите местоположение черепа, чтобы разместить отверстие для записи. Затем с помощью биты Dremel и бора создайте два отверстия в месте записи диаметром не более 300 микрон.

Далее, над мозжечком и за лямбдой, поместите отверстие для бора. Для электрода сравнения убедитесь, что провода преобразователя выровнены по отверстиям бора. Если нет, проверьте посадку передатчика и аккуратно согните электроды, чтобы выровнять отверстия с помощью щипцов с тонкими наконечниками.

Теперь обрежьте их с помощью хирургических ножниц до нужной длины. Они должны простираться выше твердой мозговой оболочки для записи ЭЭГ или проникать вниз к определенным структурам мозга. Теперь без покрытия электроды наносят на передатчик достаточное количество цианоакрилата, чтобы полностью покрыть его.

Только не попадайте клей на электроды. Если передатчик собирается делать поверхностные записи, опустите передатчик в отверстия и просто удерживайте его на месте около минуты, слегка надавливая. Если запись будет вестись из глубоких структур мозга, установите передатчик на держатель канюли и поместите его на стереотаксическую руку.

Очень важно разместить электроды трансмиттера в отверстиях для бора без загрязнения клеем. Загрязнение приведет к ухудшению сигнала. Далее добавьте еще цианоакрилатного геля, чтобы прочно закрепить крепление передатчика.

Нанесите клей кругами, покрывающими стенки передатчика. Следите за тем, чтобы не закрывать антенну. Затем нанесите 100 микролитров химического ускорителя вокруг основания передатчика из шприца.

Не допускайте его контакта с окружающими тканями. Для удаления ускорителя тщательно промойте участок половиной миллилитра стерильного физиологического раствора. Теперь зашите кожу вокруг передатчика, не покрывая ее.

Верхняя часть передатчика должна быть вынесена наружу. Для хорошей передачи сигнала используйте викрил или шелковый шовный материал. При работе с нежными щенками кожа должна быть достаточно плотно прилегать к передатчику и окружающему клею.

Теперь переложите животное из каркаса в теплое одеяло Для восстановления детали послеоперационного ухода предусмотрены в текстовом протоколе. Перенесите одно имплантированное животное в записывающую камеру. Одновременно можно наблюдать только за одним имплантированным животным, но с ним могут находиться и другие неимплантированные животные.

Чтобы настроить регистратор, подключите блок питания к базе ресивера. Далее подключите базу к системе сбора данных через БНК. Теперь поместите клетку на основание приемника сигналов.

Сигнальная лампочка должна загореться. Теперь данные можно записывать. Сначала подключите базу ресивера к рекламному конвертеру и подключите конвертер к компьютеру.

Используя настройки программного обеспечения, установите частоту дискретизации записи на 500 в секунду. Передатчик посылает сигналы ЭЭГ в диапазоне от 0,1 до 100 Гц с восьмью децибелами на каждый спад VE на обоих концах. Мы рекомендуем 500 проб в секунду во время регистрации животных с вахты на наличие признаков стресса и обезвоживания.

Щенки не должны находиться в камере более двух часов. Передатчик был разработан в форм-факторе с минимальным повреждением и длительным временем автономной работы, запись могла выполняться непрерывно в течение шести месяцев в зависимости от емкости батареи. Мыши с возрастом P 12 и старше очень хорошо переносили передатчик, как и крысы в возрасте P 6 лет.

Прикрепление цианоакрилата к черепу не препятствовало развитию, что позволяло непрерывно собирать данные на протяжении всего развития животного во взрослом возрасте. Помните, что важно держать электроды подальше от загрязнения клеем после этой процедуры. Другие методы, такие как количественный анализ обнаружения припадков, могут быть выполнены, чтобы ответить на дополнительные вопросы, такие как время, течение и тяжесть эпилептического статуса.

Этот метод проложит путь исследователям эпилепсии к изучению неонатальных припадков и моделей перинатального инсульта у грызунов.