Количественный анализ восхождение дефектов в Drosophila модели нейродегенеративных расстройств

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы количественно оценить способность к лазанию у мух дикого типа и мушек с мутантными генами, участвующими в передвижении. Это достигается путем предварительного переноса мух в стеклянный градуированный цилиндр. Второй шаг заключается в перемещении мух на дно цилиндра, слегка постукивая цилиндром по поролоновой прокладке.

Далее пересечение мухами линии цели фиксируется с помощью видеокамеры в течение двух минут. Заключительным этапом является анализ видео и нанесение графика количества мух над целевой линией каждые 10 секунд. В конечном счете, лазающий анализ используется для выявления дефектов способности к лазанию мутантных линий плодовых мушек.

Основное преимущество этого метода, или существующих методов, таких как метод Вайлда, заключается в том, что он имеет возможность обнаруживать незначительные различия в способности к лазанию. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области нейродегенеративных расстройств, такие как роль специфических генов в наследственной спастической параплегии при прогрессирующем нарушении походки. Применение этой техники имеет тенденцию к развитию терапии.

IP для неврологических расстройств, потому что он предоставляет простой количественный анализ для проверки реакции на лекарства и мутантов на кандидаты в нейродегенеративные гены. Начните с обезболивания 20 мух углекислым газом и поместите всех мух в флакон размером 25 на 95 миллиметров, в котором содержится пища. Затем храните флакон с мухами горизонтально в картонном лотке, чтобы избежать попадания в жидкость, которая может скопиться на дне флакона. Поместите мух в инкубатор по крайней мере на 21 час в течение 12-часового цикла светлой темноты на следующее утро, настройте анализ на подъем, переложив мух из флакона в стеклянный градуированный цилиндр объемом 250 миллилитров, и запечатайте верхнюю часть восковой пленкой, чтобы предотвратить побег мух.

Проводите эксперимент при окружающем освещении при температуре 22 градуса Цельсия и влажности 40%. Всегда проводите эксперименты в одно и то же время суток, чтобы избежать путаницы с циклами сна. Кроме того, отметьте расположение цилиндра на столе, чтобы он оставался постоянным каждый день.

Подсчитайте количество мертвых мух на дне цилиндра и во флаконах с едой, запишите это число как смертность. Далее установите видеокамеру на штатив. Сфокусируйте камеру на 190-миллилитровой линии 250-миллилитрового градуированного цилиндра очень легко.

Постучите цилиндром от пяти до 10 раз по поролоновой подушке с закрытыми порами с достаточной силой, чтобы сместить мухи к внутренней поверхности дна. Затем другой рукой нажмите кнопку записи на камере. Затем нажмите на цилиндр шесть раз в отчетливом неритмичном паттерне, пока камера ведет запись.

Проводите каждую попытку в течение двух минут с момента последнего нажатия на мух. Наконец, утилизируйте мух в 95% этаноле. После завершения испытания повторите этот тест 10 раз, используя каждый раз 20 свежих мух, чтобы обнаружить небольшие различия в передвижении между группами.

Вымойте баллоны в посудомоечной машине и высушите в течение ночи, чтобы использовать их повторно после завершения эксперимента Для анализа эффективности полетов начните с просмотра видео каждого испытания мух. Общее количество мух, которые проходят мимо линии цели каждые 10 секунд. Если муха поднимается обратно вниз или падает, запишите эту муху как минус один и посчитайте следующую муху, которая пересечет целевую линию, как то же число, что и муха, которая спустилась обратно вниз или упала.

Например, если 15-я муха опускается ниже целевой линии, то следующая муха, которая пересечет линию, считается 15-й, а не 16-й. Затем вычтите смертность из общего числа мух, чтобы получить количество мух, оставшихся на пробном участке. Процент мух выше целевой линии в каждый момент времени при работе с тяжелыми мутациями можно увидеть разную степень лазающего дефекта с помощью различных анализов лазания.

Здесь было зарегистрировано количество восьмидневных мух, которые забрались на вершину пустого флакона с едой через 18 секунд, что не показало существенной разницы в поведении при лазании между двумя группами. С другой стороны, используя тест на восхождение по этому протоколу, мушки-мутанты Bastin 17 dash seven over TM three демонстрируют дефицит производительности по сравнению с контрольной группой. Поскольку многие двигательные заболевания являются прогрессирующими, важно наблюдать за эволюцией мух с течением времени.

В возрасте двух дней наблюдается значительная разница в количестве мух, которые поднимаются выше целевой линии. По сравнению с контрольной группой. Эта способность к восхождению продолжает снижаться по мере того, как мутантные мухи стареют от двух до нескольких дней.

После освоения этот эксперимент и анализ могут быть завершены за три часа. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как количественно оценить дефекты локомотивов в моделях dola mutant для неврологических расстройств.