Метод Нанесение Закрытое Глава травматическое повреждение мозга в Drosophila

Общая цель этой процедуры заключается в нанесении закрытой черепно-мозговой травмы. В мухах. Это достигается путем предварительного помещения мух во флакон на расстоянии одного дюйма от дна.

Второй шаг — прикрепить флакон к устройству HIIT. Далее пружина отклоняется на определенный угол и флакон отпускается и дает ему прийти в полный покой. В конечном счете, для характеристики последствий полученной черепно-мозговой травмы можно использовать различные поведенческие, морфологические и молекулярные анализы.

Основное преимущество этого метода перед существующими методами, такими как метод снижения веса грызунов, заключается в том, что многие животные могут быть изучены за короткий промежуток времени. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области черепно-мозговой травмы, например, почему последствия черепно-мозговой травмы различаются у разных людей. Для начала соберем сырье, перечисленное в таблице 1 сопроводительного текстового протокола.

Согните хомуты с помощью плоскогубцев так, чтобы они плотно прилегали к пружине. Затем центрируйте зажимы относительно ширины доски и прижмите их друг к другу внешним зажимом заподлицо с краем доски. Отрегулируйте пружину так, чтобы она лежала параллельно длине доски, а затем прикрепите хомуты над пружиной и к доске с помощью четырех винтов.

Далее обмотайте полоску Velcro скотчем. Оказавшись вокруг свободного конца пружины, внешний край Velcro должен быть заподлицо с концом пружины. Положите крышку ведра со льдом вверх дном, по центру и плотно прижав к деревянной доске.

Расположите приподнятую область крышки ведра для льда так, чтобы длинная кромка была параллельна ширине доски. Прижмите все устройство к неподвижному объекту, например к стене, так, чтобы крышка ведра со льдом была зажата между доской и предметом и не двигалась. Затем прикрепите бумажный транспортир к нижней части картона, лоток для флаконов и поставьте его ребром по длине картона так, чтобы отметка 90 градусов совпала с пружиной.

Когда он будет оттянут обратно в идеально вертикальное положение, поместите от одной до 60 мушек под наркозом углекислого газа в пустой флакон и закройте флакон плотно прилегающим ватным тампоном. Затем проведите линию на флаконе на расстоянии одного дюйма от его основания, сбейте мухи с боков флакона и вдавите ватный тампон, пока он не совпадет с только что проведенной линией. Подождите пять минут, пока мухи восстановят подвижность от углекислого газа.

Затем вставьте конец пружины во флакон до тех пор, пока внутренний край Velcro не окажется на одном уровне с верхней частью флакона. Это фиксирует флакон на пружине, создавая плотный компрессионный фитинг, при этом пружина лежит ровно. Убедитесь, что в это время один дюйм флакона перекрывает приподнятую область крышки ведра со льдом.

Наденьте средства защиты органов слуха, так как при ударе флакона о крышку ведра со льдом издается громкий шум. Далее держите флакон в области Velcro большим и указательным пальцами левой руки, правой рукой крепко прижимайте доску к столешнице. Далее потяните пружину идеально ровно обратно на нужный угол, а затем отпустите пружину.

Дождитесь, когда пружина полностью остановится, а затем извлеките флакон из пружины. Установите флакон на столе и дайте мухам восстановиться не менее пяти минут. В течение этого времени мухи будут медленно восстанавливать свое нормальное движение.

Далее переложите мух в пробирку с кормом для мух для последующего анализа или подвергните мух еще одному удару, флаконы можно использовать многократно. Цель эксперимента заключалась в определении влияния тяжести травмы на индекс смертности через 24 часа. Тяжесть травмы определяли по углу отклонения пружины от нуля до 90 градусов до выброса.

Эксперимент проводился на мухах двух разных возрастов: мушки возрастом от 0 до 7 дней и мухи возрастом от 20 до 27 дней. Результаты показывают, что более тяжелые травмы вызывают более высокий индекс смертности. Старые мухи имели повышенный индекс смертности по сравнению с молодыми мухами, когда весеннее отклонение составляло 50 градусов или выше.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как нанести черепно-мозговую травму с помощью мух.