Модификация Colliculo-таламокортикального мозга мыши фрагмент, включающий 3-D печать палаты компонентов и нескольких масштаб оптических изображений

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы подготовить корковый срез Calot Thal с четырьмя основными слуховыми структурами: нижней колусом, слуховым таламусом, слуховой частью ретикулярного ядра таламуса и слуховой корой. Это достигается путем удаления мозга из мыши. Второй шаг — блокировка мозга при подготовке к нарезке.

Далее разрежьте мозг, чтобы получить срезы, содержащие корковое соединение Calot. Последним шагом является использование визуализации флавопротеинов для оценки связности. В конечном счете, срез мозга, содержащий кортикальную связь сонной артерии, может быть использован для различных экспериментов, чтобы лучше понять обработку информации в слуховых областях среднего и четвертого мозга. что является ключом к получению неповрежденных проекций.

Чтобы подготовить этап резки к нарезке, отрежьте небольшой кусок 3%-ного шнека размером примерно один кубический сантиметр, который будет использоваться в качестве опоры для мозга, и еще один кусок размером 1,5 сантиметра на 1,5 миллиметра на три миллиметра, который будет использоваться в качестве выступа для поддержки нижнего холма. Затем приклейте ограничитель к сцене цианоакрилатным клеем, а затем приклейте выступ с правой стороны упора таким образом, чтобы они образовали угол 80 градусов на слайде, отмеченном двумя линиями под углом 90 градусов и диагональной линией под углом 17 градусов от верхнего левого угла к нижнему правому месту. С помощью лезвия бритвы удалите от двух до четырех миллиметров рострального конца мозга, чтобы создать плоскую поверхность.

Затем поместите мозг стороной вверх на только что созданную плоскую поверхность. Выровняйте дорсальную поверхность мозга горизонтальной линией, а среднюю линию мозга — вертикальной линией, отмеченной на предметном стекле. Затем совместите лезвие бритвы с линией 17 градусов.

Наклоните бритву под углом 30 градусов и удалите примерно три миллиметра правой коры головного мозга в двойном диагональном разрезе, чтобы закрепить мозг на стадии вибрато. Положите небольшой лист фильтровальной бумаги на вентральную сторону мозга так, чтобы длинное измерение было перпендикулярно средней линии. Осторожно нанесите небольшое количество цианоакрилатного клея на область перед ограничителем и слева от неровности.

Затем поместите двойную диагонально разрезанную сторону мозга на клей так, чтобы зубчатая часть мозга и задний мозг были прижаты к бугорку, а правая сторона мозга была прижата к упору. В этой процедуре быстро поместите режущий стол в вибрато, соорудите стол с режущим раствором. Далее выровняйте лезвие с верхней частью мозга.

Удалите от одного до 1,5 миллиметра от верхней части мозга. Затем нарежьте и удалите еще ломтики размером от 300 до 500 микрометров, продвигаясь вглубь. Когда видны нижний холмик, медиальное тело и латеральное ядро ICT, зубчатая извилина должна иметь форму буквы С, а структура должна быть выровнена.

Получается примерно два среза по 600 микрометров. Это срезы кортикальной коры сонной артерии. После этого перенесите их в камеру выдержки при температуре 32 градуса Цельсия.

Чтобы получить изображение автофлуоресценции флавопротеина, соберите изображения с частотой в четыре герца в течение 105 секунд. Осветите ткань синим светом от 470 до 490 нанометров и захватите с высотой выше 515 нанометров, убедившись, что изображение не будет слишком темным или засвеченным. Затем используйте электрическую стимуляцию для активации ткани для получения изображения кальция.

Собирайте изображения с частотой 10 герц в течение 25 секунд. Освещайте ткань светом с яркостью 365 нанометров и регистрируйте флуоресценцию выше 510 нанометров. Опять же, убедитесь, что изображение не слишком темное и не засвеченное.

Затем используйте электрическую стимуляцию для активации клеток. На этом изображении показано подтверждение соединения коры сонной артерии в срезе мозга с помощью флотопротеиновой аутофлуоресценции. Электрическая стимуляция, подаваемая на частоте 0,05 герц нижнему колусу, визуализировалась с частотой 4 герц и четырьмя герц, чтобы показать мощность этой стимуляции.

Частота, слуховой таламус, таламический, сетчатый, ядро и слуховая кора активируются синаптически активно. Вот несвязанный срез. Электрическая стимуляция нижнего колуса с активацией наблюдалась только в слуховом таламусе.

Весь путь не был захвачен, вероятно, из-за того, что один из разрезов был немного смещен от плоскости. С корковыми проекциями Алама. На этом изображении показана атипичная активация слуховой коры.

Электрическая стимуляция нижнего колуса активировала слуховую кору без видимого сигнала. В слуховом таламусе, вероятно, таламус все еще был активирован, но его не было на поверхности изображения. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как получить срез коры таламуса AAL, и оценить его связность.