15 января 2017 г.
Это видео демонстрирует модель для изучения развития гиперплазии миоинтимы после операции венозной интерпозиции у крыс.
Общей целью данной процедуры является изучение проходимости шунтирования трансплантата в модели интерпозиции вен крысы. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области шунтирования, такие как основной путь биологических и физиологических процессов во время шунтирования. Основное преимущество этой методики заключается в том, что хирургическая процедура проста и быстра, что может быть использовано для изучения новых методов лечения и трактов in vivo.
Демонстрировать методику будет Григол Тедиашвили, микрохирург из нашей лаборатории. Перед операцией проверьте достаточную глубину анестезии, ущипнув задние лапы крысы и убедившись в отсутствии рефлексов. Затем нанесите немного ветеринарной мази на глаза, чтобы предотвратить сухость во время анестезии.
Далее раздвиньте задние лапы и зафиксируйте их положение с помощью скотча. Затем сбрейте паховые волосы триммером для волос, а затем широко продезинфицируйте область с помощью повидон-йода с последующим добавлением 80% спирта. Повторите эти чередующиеся скрабы в общей сложности три раза.
Теперь под микроскопом выполните вертикальный разрез по паховой линии. Затем с помощью двух щипцов аккуратно отделите подкожные ткани и обнажите поверхностную эпигастральную вену до ее начала на бедренной вене. Делайте это очень аккуратно, так как вена хрупкая.
Далее остановите кровоток через поверхностную эпигастральную вену с помощью двух зажимов. Теперь соберите сегмент жилы. Осторожно приподнимите изолированную вену и разрежьте сосуд с помощью микроножниц.
Затем поместите сегмент вены на стерильную марлю. Там осторожно вставьте иглу 30 калибра в один конец и промойте вену гепарином. Затем переведите вену в 1% лидокаин и держите ее на льду, чтобы предотвратить спазмы.
Теперь усыпьте крысу-донора, увеличив анестезию до 5% изофлурана. Далее, при подготовке к анастамозу, подготовьте крысу-реципиента так же, как и крысу-донора, вплоть до этапа бритья. Через две-три минуты приема 5% изофлурана вскройте брюшную полость донорской крысы по белой линии, разрежьте диафрагму и удалите сердце, чтобы остановить кровообращение.
Продолжайте подготовку крысы-реципиента к операции. Побрейте медиальную сторону ног триммером для волос и продезинфицируйте кожу тремя чередующимися скрабами повидон-йода и 80% этанола. Прежде чем двигаться дальше, выполните еще одно щипоние пальцев ног, чтобы контролировать анестезию.
Теперь выполните срединный разрез бедренной кости от колена до паховой складки. Под микроскопом с помощью двух щипцов отделите бедренную артерию от окружающей ее среды. Затем с помощью двух микрозажимов остановите кровоток, сначала поместив проксимальный зажим.
Далее вырезаем короткий отрезок зажатой бедренной артерии и отбрасываем его. Укоротите оставшуюся артериальную культю, чтобы оставить промежуток на один-два миллиметра больше, чем венозный трансплантат. Затем промойте артериальную культю гепарином из иглы 30-го калибра.
Если адвентиция немного выступает за пределы культи сосуда, с помощью щипцов слегка натяните адвентицию на конец сосуда, а затем удалите кусочек адвентиции. Теперь поместите собранный сегмент вены между артериальными культями в правильной ориентации и отрегулируйте размер промежутка для хорошей посадки. Теперь сначала выполните проксимальный анастомоз с использованием проленового шва 10-0.
Начните с наложения швов на каждую боковую сторону, затем добавьте еще три шва на вентральную сторону. Завершите тремя стежками с тыльной стороны. Затем соедините дистальные сосуды по той же технике, начиная со шва с каждой боковой стороны, затем трех швов на вентральной стороне, а затем заканчивая дорсальной стороной.
После завершения анастомозов загрузите два одномиллилитровых шприца с компонентами фибринового клея. Затем осторожно приподнимите трансплантат с помощью щипцов и внесите под трансплантат примерно 100 микролитров первого компонента, а затем 100 микролитров второго компонента. Эти два компонента всегда должны добавляться в одних и тех же объемах.
Теперь верните трансплантат на место и нанесите по 100 микролитров каждого компонента на трансплантат, чтобы полностью покрыть трансплантат и анастомоз. Это предотвращает недостаточность анастомоза и чрезмерное растяжение венозного трансплантата. Теперь осторожно откройте зажимы, начиная с дистального зажима.
Затем подтвердите успешную операцию, проверив видимый пульс в трансплантированной вене и дистальной артерии трансплантата. Перед закрытием кожи удалите излишки клея, которые могут препятствовать закрытию. Затем закройте слои кожи с помощью 5-0 проленевых швов.
Прежде чем крыса проснутся, введите подкожно четыре-пять миллиграммов карпрофена на килограмм. Следите за животным до тех пор, пока оно не придет в сознание, достаточное для поддержания лежачего положения на грудине. Затем дайте крысе домашнюю клетку без других животных.
В течение следующих трех дней добавляйте метамизол в питьевую воду и ежедневно проверяйте выздоровление крысы. После полного выздоровления крысу можно содержать вместе с другими крысами. Животные хорошо восстанавливаются после операции и показали отличное физическое состояние после операции.
Успешная интеграция вены в бедренную артерию и проходимость трансплантата после трансплантации были подтверждены неинвазивно с помощью дуплексной сонографии. При пересадке вены люке-положительной крысы луке-отрицательной крысе была использована биолюминесцентная визуализация для мониторинга присутствия трансплантата. Было установлено, что гиперплазия миоинтимы прогрессивно развивается в трансплантате с течением времени.
Гистологическое окрашивание трихромом Массона демонстрирует формирование миоинтимы внутри внутренней эластической пластинки. Для подтверждения того, что модель воспроизводит динамику гиперплазии миоинтимы, была измерена облитерация просвета. Отмечалась постепенная потеря проходимости трансплантата от 7 до 28 дней после операции, что хорошо подходит модели.
После освоения этой техники ее можно выполнить за 20 минут, если она выполнена правильно. Спасибо за просмотр, и удачи в ваших экспериментах.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
В данном видео представлена модель для изучения развития интимальной гиперплазии после операции по венозному интерпозиционному шунтированию у крыс. Процедура направлена на исследование проходимости обходного шунта и биологических процессов, происходящих при его окклюзии.
Данная модель интерпозиции вены крысы представляет собой экономически эффективную и масштабируемую систему для изучения потери проходимости шунтирующего трансплантата, что является критической проблемой при разработке методов лечения сосудистых заболеваний. Обеспечивая возможность лонгитюдной оценки миоинтимальной гиперплазии — основной причины несостоятельности трансплантата — эта модель способствует механистическому снижению рисков при внедрении новых методов воздействия на пути сосудистого ремоделирования. Совместимость модели с дуплексной сонографией и гистологическим анализом позволяет получать количественные, трансляционные результаты, которые служат основанием для принятия решений о целесообразности дальнейшей разработки в рамках доклинических исследований.
Данная модель вписывается в континуум от этапа поиска до доклинических исследований, особенно в рамках программ по сосудистой биологии, направленных на изучение рестеноза, несостоятельности трансплантатов или антипролиферативной терапии.