Модель травматической травмы спинного мозга на мышах на мышах

Общая цель этого видео состоит в том, чтобы представить новую модель контузиозной травмы спинного мозга на основе смещения тканей, которая может привести к последовательной контузионной травме спинного мозга у взрослых мышей. Эта модель ушиба может помочь ответить на ключевые вопросы в области экспериментальной травмы спинного мозга. Основным преимуществом этой методики является то, что она приводит к очень последовательному повреждению спинного мозга.

Применение этого метода распространяется и на терапию травм спинного мозга, поскольку эта модель предоставляет надежные и воспроизводимые инструменты для изучения механизмов травмы и эффектов экспериментальных методов лечения. Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, испытывают трудности, потому что они не знакомы с новым импактором. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку некоторые шаги трудно освоить из-за ручных и программных операций.

Начните с того, что поднесите автоклавные хирургические инструменты и металлический стабилизатор позвоночника на чистый хирургический стол. Согрейте грелку до 37 градусов по Цельсию. Затем положите грелку на операционный стол и накройте стерильными хирургическими простынями.

Для этого исследования используются 10-недельные самки, C57BL6J мыши. После введения внутрибрюшинной инъекции кетамина и ксилазина проверьте адекватный уровень анестезии по отсутствию какой-либо реакции на стимуляцию ноцицепции, вызванную защемлением лапы. Подкожно вводите бупренорфин, обезболивающее средство, и карпрофен, нестероидный противовоспалительный препарат.

Используйте электрические машинки для стрижки волос над грудопоясничным отделом позвоночника. Протрите кожу раствором бетадина и 70% спиртовыми салфетками. Нанесите офтальмологическую мазь на роговицу, чтобы защитить глаза от пересыхания.

Сделав разрез кожи средней линии на 1,5 см на спине животного над девятой-11-й грудными пластинками позвонков, отодвигайте подкожную жировую ткань рострально. С помощью тонких ножниц, тонких щипцов и втягивающего устройства агрикола рассеките параспинальные мышцы в сторону от остистых отростков и пластинок по направлению к боковым фаскетам с каждой стороны. Поместите мышь на U-образный контейнер стабилизатора, зажмите рычаги из нержавеющей стали под открытыми гранями позвонка t10 с обеих сторон и затяните рычаги с помощью прикрепленных к ним винтов с накатанной головкой.

Используйте микроронжер, чтобы удалить остистый отросток t10 и пластинку, которая обнажает модель твердой мозговой оболочки, находящуюся над спинным мозгом. Поместите U-образный контейнер с мышкой на столик импактора и зафиксируйте столик на месте, затянув винты с накатанной головкой крепления. Чтобы настроить импактор, сначала поверните ручку регулятора давления на азотном баке, чтобы установить сжатый азот на 20 фунтов на квадратный дюйм или 138 килпаскаль для исследования.

Простерилизуйте ударный наконечник объемом 1,2 миллилитра 70%-ным спиртом. Затем откройте пакет программного обеспечения на компьютере. Нажмите кнопку на одном из блоков управления, чтобы активировать наконечник ударного элемента в полностью выдвинутое положение.

На экране компьютера в разделе «Установить нулевой уровень» нажмите «Начать чтение», чтобы измерить расстояние до полностью выдвинутого наконечника поршня. Расстояние будет показано в качестве параметра дальности в этой зоне. Затем нажмите на «Установить ноль», и в поле с нулевым параметром появится число в миллилитрах.

Затем нажмите одну кнопку на блоке управления, чтобы извлечь наконечник ударного элемента. Затем разблокируйте крепежный винт, потяните винт, чтобы отодвинуть наконечник от траектории лазерного луча, и поверните винт на 90 градусов по часовой стрелке, чтобы зафиксировать. Теперь переместите столик крепления, отрегулировав фронтальный и боковой микродрайверы, чтобы направить лазерный луч на центр обнаженного спинного мозга.

После того, как место повреждения будет выбрано, измерьте расстояние между тканями, нажав кнопку «Начать чтение» под установленным уровнем травмы. С помощью вертикального микродрайвера медленно регулируйте расстояние между датчиком и спинным мозгом, пока не будет достигнут желаемый параметр смещения. Этот уровень находится ниже установленного уровня травмы в поле параметров травмы.

Когда желаемое смещение травмы будет достигнуто, запишите расстояние до ткани, показанное в поле параметра диапазона, затем определите желаемое смещение или травму, вычитая расстояние или диапазон от расстояния до кончика равным нулю. Затем нажмите «Установить травму» в разделе «Установленный уровень травмы». Далее разблокируйте винт, повернув его на 90 градусов против часовой стрелки.

Отодвиньте ударный наконечник обратно на траекторию лазерного луча и заблокируйте винт, повернув его на 90 градусов по часовой стрелке, нажмите кнопку «Выполнить» в разделе «Запустить эксперимент», чтобы выполнить удар. В полях параметров будет указано время травмы в секундах, сила в микровольтах, скорость в метрах в секунду и смещение травмы в миллиметрах. После того, как все данные о травмах будут записаны и сохранены, уберите U-образное корыто с мышкой со сцены.

Затем визуально подтвердить травму спинного мозга под операционным микроскопом. После наложения швов на разрез послойно введите животному подкожно один миллиметр 0,9% физиологического раствора для гидратации и поместите его на подушечку с регулируемой температурой до тех пор, пока не придет в сознание. Затем поместите мышь в чистую клетку с легкодоступной водой и едой.

Эти данные показывают противоречивые параметры травмы, демонстрируют, что ударный элемент может нанести надежную и воспроизводимую травму. На этом репрезентативном поперечном срезе, окрашенном крезилом-фиолетовым-эозином, показана область t10 спинного мозга после фиктивной травмы со смещением 0 миллиметров. На этом изображении показан эпицентр легкой контузионной травмы спинного мозга в момент t10 с использованием устройства со смещением 0,2 мм.

Эта травма средней тяжести была достигнута с использованием смещения 0,5 миллиметра. Наконец, эта тяжелая травма является результатом смещения на 0,8 миллиметра. Эти изображения показывают, что этот новый импактор может привести к градуированной контузионной травме.

После освоения этой техники ее можно выполнить за 30 минут при правильном выполнении. Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить о том, что необходимо установить ноль для кончика ударного элемента в целях для спинного мозга. После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области травм спинного мозга к изучению механизмов и методов лечения мышей, крыс и приматов.

После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как использовать этот ударный элемент для получения контузионной травмы спинного мозга.