Мышиные Полная толщина кожи Трансплантация

Общая цель данного видеоматериала — выполнить полнослойную пересадку кожи и описать важные этапы, необходимые для успешного проведения процедуры. Полнослойная пересадка кожи у мышей является общепризнанной моделью для изучения аллоиммунных ответов и отторжения трансплантата. Данная процедура проста в исполнении и не требует применения сложных микрохирургических методов.

Отторжение трансплантата в данной модели происходит в ходе очень воспроизводимой иммунологической реакции и легко отслеживается путем прямого осмотра и пальпации. Кроме того, для создания более сложных моделей трансплантации может быть выполнена вторичная пересадка кожи с использованием донорских или сторонних кожных трансплантатов, что представляет собой альтернативный и простой метод оценки донор-специфической толерантности. После проведения анестезии мыши-донора согласно текстовому протоколу, используйте электрическую бритву, чтобы выбрить шерсть на спине животного.

Затем продезинфицируйте кожу 10% раствором повидон-йода. С помощью ножниц и метода тупой диссекции вырежьте донорский лоскут кожи спины от бедра до шеи на уровне ареолярной соединительной ткани. Поместите кожу спины под микроскоп и с помощью тонких тенотомических ножниц отделите соединительную ткань и panniculus carnosus от кожи.

Вырежьте трансплантаты размером 15 на 15 миллиметров из кожи спины для ложа трансплантата размером от 10 на 10 до 15 на 15 миллиметров. Храните трансплантаты в чашке Петри на марле, смоченной в PBS, и поместите её на лёд. Проведите анестезию мыши-реципиента согласно текстовому протоколу.

Выбрейте шерсть на боковой поверхности спины животного в месте введения трансплантата, затем введите бупренорфин в дозе 0,02 мг/кг для послеоперационного обезболивания. Для дезинфекции области используйте 10% раствор повидон-йода. С помощью ножниц максимально поверхностно вырежьте квадрат кожи размером от 10×10 до 15×15 мм.

Следите за тем, чтобы сохранить panniculus carnosus и проходящие над ним кровеносные сосуды. Затем поместите трансплантат на ложе для трансплантата, избегая образования складок по краям. После этого наложите восемь швов по углам трансплантата и посередине каждого края, проходя иглой сквозь трансплантат, а затем сквозь panniculus carnosus ложа трансплантата, ниже окружающей кожи реципиента.

Положите сложенную марлю на сложенный вдвое бинт, затем поместите животное на бинт стороной трансплантата вниз, сняв анестезиологическую маску, чтобы животное частично восстановилось. После этого обмотайте животное бинтом. Наиболее критическим фактором в процессе приживления является реваскуляризация ткани трансплантата за счет прорастания сосудов реципиента в трансплантат.

Рассечение panniculus carnosus и правильное наложение повязки являются наиболее важными этапами. Сразу после операции введите 5 мг на кг энрофлоксацина для профилактики инфекции. Поместите мышь с трансплантатом в чистую клетку до полного восстановления после наркоза.

Наблюдайте за мышью в течение одного часа после операции, прежде чем вернуть её в виварий. Внимательно следите за животным в период восстановления, чтобы убедиться, что повязка не ограничивает экскурсию грудной клетки и дыхание. Спустя восемь дней осмотрите и пропальпируйте трансплантат на наличие признаков струпьеобразования, контракции или уплотнения.

При наличии любого из этих признаков можно сделать вывод, что трансплантат не достиг надлежащей васкуляризации, и такой случай следует считать технической неудачей. Ежедневно проверяйте трансплантат на наличие признаков отторжения. Трансплантат считается отторгнутым, если некротизировано 90% или более его ткани.

В моделях с полным несоответствием полнослойные трансплантаты кожи обычно отторгаются через 8–12 дней. В моделях с частичным несоответствием реакции отторжения протекают медленнее, более вариабельно, а внешний вид кожного транспланта характеризуется менее выраженными изменениями, такими как сокращение площади или потеря волосяного покрова. Острое отторжение трансплантата обычно начинается с отека и эритемы в области трансплантата.

За этими событиями следуют высыхание трансплантата, образование струпья и сморщивание, как показано здесь. В зависимости от степени несовместимости MHC и протокола иммуносупрессии отторжение может происходить по субс acute процессу, характеризующемуся малозаметными изменениями, такими как потеря волос, изменение пигментации, сглаживание кожных гребней и уменьшение объема трансплантата. В таких случаях отторгнутый трансплантат выглядит блестящим, белым и лишенным волос, с неровными краями.

При использовании мышей линии BALB/c в качестве доноров и C57 black 6 в качестве реципиентов было обнаружено, что ингибирование гликолиза и окислительного фосфорилирования или только метаболизма глутамина продлевало выживаемость кожного трансплантата. Однако одновременное блокирование этих трех путей привело к значительному увеличению выживаемости трансплантата. Более того, тройная метаболическая терапия оказалась более эффективной, чем традиционное применение циклоспорина или рапамицина.

Кроме того, гистология кожных трансплантатов в группе метаболической терапии демонстрировала более сохранную структуру тканей и меньшую лимфоцитарную воспалительную инфильтрацию по сравнению с необработанной тканью. Результаты трансплантации органов значительно улучшились благодаря совершенствованию хирургических процедур и протоколов иммуносупрессии. Однако длительная иммуносупрессия сопровождается значительными побочными эффектами, и разработка новых стратегий, способствующих развитию толерантности, остается целью современных исследований в области трансплантологии.

Об importance метаболизма в регуляции T-клеток известно давно. Подавляя гликолиз, окислительное фосфорилирование и метаболизм глутамина, нам удалось значительно увеличить выживаемость аллотрансплантата. Этот новый подход оказался более эффективным, чем традиционная терапия, и представляет собой смену парадигмы в потенциальном подходе к иммунной регуляции и трансплантации.