Модель инвертированного сердца для междоузлийной коллекции трансмутаций из изолированного сердца крысы

Общая цель этой модели перевернутого сердца состоит в том, чтобы собрать сердечный интерстициальный транссудат из изолированного сердца крысы. В бьющемся сердце индивидуальное чувство сердца высвобождает паракринные факторы, которые высвобождают их в окружающее пространство интерстициальной жидкости. Это важно, потому что пространство интерстициальной жидкости, оно несет информацию для связи между сердечными клетками.

А это особенно важно в условиях воспаления и регенерации инфарктированного миокарда. В этом видео мои коллеги, д-р Дин и Тан, покажут вам методы, с помощью которых мы здесь, в этой э-э-э, собираем интерстициальную жидкость с поверхности изолированного перфузированного крысиного сердца. Чтобы сделать латексную крышку в виде сердца, или колпачок, используйте алюминиевую форму, которая соответствует среднему размеру крысиного сердца и была отполирована сверхтонкой наждачной бумагой.

Вертикально закрепите горловину формы на фрезерном станке и начните медленно вращать форму. Затем налейте 20 миллилитров жидкого латекса в стеклянный стакан объемом 50 миллилитров, и опустите вращающуюся форму в латекс до тех пор, пока она не будет погружена. Затем медленно вытащите его и продолжайте вращать форму еще 15 минут, пока латекс не застынет.

Вращение жизненно важно для приготовления этого мусса и равномерного распределения слоя жидкого латекса по поверхности формы. Итак, убедитесь, что форма вращается при подъеме из латекса. Как только латекс высохнет, покройте его тальком, чтобы предотвратить повреждение латекса.

Остановите вращение, затем аккуратно отсоедините форму от машины. Аккуратно выньте латекс из формы. Теперь прикрепите силиконовую трубку длиной 25 сантиметров к выходному отверстию на латексном колпачке.

Эта трубка используется для сбора интерстициального сердечного транссудата, или КТ. Затем прочно прикрепите желудочковый баллон размером с крысу к L-образной металлической канюле, соединенной со шприцем, наполненным водой объемом в один миллилитр. И наполните желудочковый баллон размером с крысу водой. Убедитесь, что баллон герметичный, надув и спустив его несколько раз с помощью шприца.

Затем подключите канюлю к датчику давления с помощью трехстороннего упора. Наконец, сделайте отметку на шприце, где баллон будет заполнять полость желудочка для измерения внутрижелудочкового давления. Прежде чем приступить к подготовке сердца, подготовьте перфузионную систему Лангендорфа в соответствии с текстовым протоколом.

Теперь, после полной анестезии самца крысы Wistar весом от 300 до 350 граммов, перенесите его на операционный стол комнатной температуры. Опыт показывает, что следующие шаги, ведущие к канюляции сердца, должны занимать всего около трех минут. Поднимите кожу и мышцы чуть ниже грудины с помощью щипцов и разрежьте вокруг нижнего края ребер с помощью тяжелых ножниц.

Далее тонкими ножницами сделайте небольшой надрез в диафрагме по краю ребра. Далее разрежьте ребро каудально, чтобы сделать лоскут всей брюшной грудной стенки. Теперь мягко возьмитесь за сердце и медленно развивайте его, пока сердечные сосуды не начнут растягиваться.

Затем иссекайте сердце до тех пор, пока аорта полностью не обнажится, и переложите сердце в стакан объемом 100 миллилитров, содержащий 50 миллилитров ледяного KHB. Теперь немедленно отнесите сердце к аппарату для обильности и установите аорту на капающую канюлю. Плотно закрепите его швом 4-0, чтобы пузырьки воздуха не могли попасть в сердце.

Затем примените либо постоянное давление обильности, либо обильный поток. Чтобы установить перевернутое сердце, сначала осторожно вращайте аортальную канюлю до тех пор, пока задняя стенка сердца не окажется лицом к лицу. Затем отрежьте соединительную ткань, чтобы открыть отверстие в левом предсердии.

Далее аккуратно возьмитесь за сердечко и переверните его вверх ногами. Установите сердце на подготовленный желудочковый баллон со спущенным баллоном и подайте его в левый желудочек. Теперь сердце механически стабилизируется в вертикальном положении, используя узел баллонного катетера в качестве опоры.

Надувайте баллон до тех пор, пока он не заполнит всю полость желудочка, продвигая поршень к отметке заполнения. Обезопасьте сердце, чтобы минимальная нагрузка на корень аорты была минимальной. Эта часть процедуры требует практики.

Теперь понаблюдайте за манометром на воздушном шаре и отрегулируйте диастолическое давление до трех-пяти миллиметров ртутного столба. На эпикарде должны образоваться мелкие капельки, если давление выставлено правильно. Далее аккуратно натяните латексный колпачок на сердце.

Даже самая поверхность желудочков должна быть покрыта. Прежде чем продолжить, проверьте наличие пузырьков воздуха внутри колпачка. Чтобы удалить пузырьки воздуха, используйте мягкое отсасывание из шприца.

Теперь расположите конец пусковой трубки на 10 сантиметров ниже сердца. Соберите капельный КТ в пробирку объемом 1,5 миллилитра и поддерживайте температуру трубки ниже четырех градусов Цельсия, поместив ее в смесь льда и хлорида натрия в соотношении 1:1. Соберите от 0,15 до 1,5 миллилитров КТ, затем взвесьте образец и заморозьте его в жидком азоте.

Храните его при температуре минус 80 градусов по Цельсию до тех пор, пока его можно будет переработать. При ретроперфузии модели перевернутого сердца при постоянном давлении 100 сантиметров воды может быть собрано от 1/10 до 1% коронарного венозного стока. Содержание белка в КТ измерялось с помощью анализа БЦА и составляло в среднем 1,1 мг на миллилитр.

Простой гель-электрофорез выявил широкий спектр белков. Нормальные образцы сравнивали с образцами из сердец, подвергшихся 50-минутной ишемической реперфузии с использованием 2D DIGE. Было обнаружено, что некоторые белки активируются в КТ ишемизированных сердец.

Протеомный анализ проводили на повышенных белках. Большой интерес представляли и пурины. Пурины являются основными сигнальными молекулами, которые регулируют сердечный иммунный ответ, вазомоторный тонус и сердечную функцию, особенно после ишемического повреждения.

Анализ ВЭЖХ на КТ показал повышенные концентрации многих пуринов в поврежденных сердцах. При попытке проведения этой процедуры важно помнить, что сердечный транс-индат, формирующийся в изолированном сердце, не будет полностью имитировать истинный состав состояний in-vee-vuh.