Введение в клеточный метаболизм

Клеточный метаболизм относится к жизненно важным метаболическим реакциям, происходящим внутри клетки. Когда большинство людей думают о «метаболизме», они ассоциируют его с «сжиганием» или расщеплением питательных веществ. Однако в клеточной биологии метаболизм включает в себя «катаболизм», то есть расщепление молекул, и «анаболизм», то есть синтез новых биологических соединений. Эти процессы обеспечивают клетки энергией, и помогают строить их компоненты, соответственно.

В этом видео мы углубимся в основные открытия, которые внесли свой вклад в наше понимание клеточного метаболизма. После этого мы рассмотрим ключевые вопросы в этой области, а также некоторые методы, используемые в настоящее время для изучения метаболических путей.

Давайте погрузимся в богатую историю клеточного метаболизма.

Между 1770 и 1805 годами четыре химика провели ключевые эксперименты, которые помогли объяснить, как растения производят «массу» для роста. Их работа привела к базовой реакции фотосинтеза, которая установила, что под воздействием солнечного света растения поглощают углекислый газ и воду, а также производят кислород и органические вещества. Позже, в 1860-х годах, Юлиус фон Сакс определил, что этим органическим веществом является крахмал, который состоит из сахара глюкозы.

Итак, растения производят сахар. Но мы его потребляем. Так что же происходит с сахаром в нашем организме? Потенциальный ответ пришел в 1930-х годах, когда Густав Эмбден, Отто Мейерхоф и Якоб Парнас описали гликолиз — путь, который расщепляет глюкозу на пируват. Теперь мы знаем, что гликолиз также производит аденозинтрифосфат или АТФ.

Структура АТФ была определена в 1935 году в лаборатории Мейерхофа Карлом Ломаном. Мейерхоф и Ломан предположили, что АТФ может «хранить» энергию, что было подтверждено Фрицем Липманом в 1941 году, который определил богатые энергией связи в АТФ и предложил теорию, с помощью которой эти связи могут быть использованы во время биосинтеза.

Параллельно с этим Ганс Кребс обнаружил, что окисление глюкозы или пирувата может стимулироваться рядом кислот, все из которых являются частью циклических реакций, образующих цикл трикарбоновых кислот, сокращенно называемый циклом ТСА. Его основным вкладом было указание на то, что оксалоацетат и пируват могут быть преобразованы в цитрат, что придает этому ряду окисления циклическую форму.

В 1946 году Липман и Натан Каплан дополнительно пролили свет на реакцию превращения пирувата в цитрат, открыв коэнзим А. Теперь мы знаем, что пируват взаимодействует с этим ферментом с образованием ацетил-коэнзима А, который запускает цикл ТСА.

Позже, между 1950-ми и 1970-ми годами, исследователи определили, что электроны, высвобождающиеся во время цикла ТСА, могут «переноситься» к белковым комплексам, расположенным в митохондриях, по пути, называемому цепью переноса электронов. Важно отметить, что в 1961 году Питер Митчелл предположил, что перенос электронов между этими комплексами создает протонный «градиент», который может управлять производством большей части АТФ клетки.

Взятые вместе, открытия в области фотосинтеза, гликолиза, цикла ТСА и цепи переноса электронов сформировали фундамент, на котором сегодня базируются современные исследования клеточного метаболизма.

Хотя эти исторические открытия дали огромное представление о метаболических путях, они также вызвали несколько вопросов. Давайте рассмотрим некоторые из тех, которые остались без ответа.

Сегодня исследователи изучают, как на метаболические пути влияют стрессоры окружающей среды, такие как токсины или радиация. В частности, существует интерес к тому, как такие факторы приводят к аномальному образованию активных форм кислорода, таких как свободные радикалы, которые обладают неспаренными электронами на атомах кислорода, что делает их высокореакционноспособными. Эти молекулы могут повреждать другие клеточные компоненты и приводить к окислительному стрессу.

Окислительный стресс связан с клеточным старением и смертью, а также с инициацией и прогрессированием рака. Поэтому клеточные биологи заинтересованы в том, чтобы определить, как эти реактивные вещества влияют на нормальные физиологические процессы клетки, такие как деление клеток. Обладая этой информацией, они могут в дальнейшем сделать вывод о роли этих видов в патологических событиях.

Наконец, некоторые исследователи интересуются метаболическими нарушениями — состояниями, при которых нарушаются определенные метаболические реакции. К ним относятся такие заболевания, как диабет, при которых организм не может метаболизировать сахар. В настоящее время исследователи пытаются определить факторы, такие как гены или сигналы окружающей среды, которые способствуют таким заболеваниям. В конечном итоге это поможет им в разработке более эффективных методов лечения пациентов.

Теперь, когда вы услышали несколько насущных вопросов в области клеточного метаболизма, давайте рассмотрим экспериментальные методы, которые ученые используют для их решения.

Конечной целью многих катаболических процессов в живых клетках является генерация АТФ, которая является основной молекулой хранения энергии, используемой клетками. Таким образом, такие методы, как биолюминесцентный анализ АТФ, который количественно определяет АТФ в образце с помощью люминесцентной реакции, могут дать представление о метаболической активности клеток.

Другие методы сосредоточены на конкретных метаболических путях. Например, исследователи могут оценить метаболизм гликогена в его мономер глюкозу. Одним из способов сделать это является переработка глюкозы, полученной из гликогена, в продукты, которые будут реагировать с детектирующими зондами и вызывать изменение цвета или флуоресценцию. Таким образом, исследователи могут рассчитать, сколько гликогена изначально присутствовало в их образцах.

Напротив, аномальный метаболизм можно обнаружить путем измерения активных форм кислорода. Как правило, исследователи используют зонд, который флуоресцирует после того, как его «атаковал» представитель этого вида. Эти анализы напрямую количественно определяют количество активных метаболитов кислорода и, следовательно, помогают в обнаружении окислительного стресса.

Наконец, исследователи анализируют метаболизм на уровне организма с помощью «метаболического профилирования». С помощью передовых методов, таких как высокоэффективная жидкостная хроматография или ВЭЖХ, а также масс-спектрометрия или рассеянный склероз, ученые могут количественно оценить метаболиты, присутствующие в биологических образцах, и определить, являются ли определенные метаболические пути остановленными или сверхактивными.

Имея в своем распоряжении все эти инструменты, давайте посмотрим, как ученые используют их в экспериментах.

Некоторые ученые применяют эти методы для разработки новых способов диагностики метаболических нарушений. Здесь был разработан протокол выделения мононуклеарных клеток периферической крови, или PBMC, из образцов крови пациента с целью оценки содержания в них гликогена. Используя анализ окрашивания, специфичный для метаболизма гликогена, исследователи получили представление о количестве гликогена, присутствующего в этих образцах. В будущих приложениях этот метод может помочь диагностировать пациентов с метаболическими заболеваниями гликогена.

Другие исследователи используют эти инструменты для изучения влияния стресса окружающей среды на метаболизм. В этом эксперименте ученые измерили активные формы кислорода в эмбрионах рыбок данио, обработанных химическим веществом под названием ротенон, или после повреждения их хвостов. Это было сделано с помощью зонда, который флуоресцирует красным цветом под воздействием активных форм кислорода. Последующая оценка цельных эмбрионов выявила повышенную продукцию этих молекул в ответ на травму и химическое воздействие, что позволяет предположить защитную роль этих метаболитов.

Наконец, клеточные биологи также изучают метаболические характеристики раковых клеток. Здесь исследователи собрали содержимое клеток рака толстой кишки человека и подвергли этот экстракт метаболическому профилированию с использованием ВЭЖХ и РС. Это позволило исследователям идентифицировать метаболиты, присутствующие в этой пораженной ткани.

Вы только что посмотрели вводное видео JoVE по клеточному метаболизму. Многие сложные пути описывают метаболическую активность клеток, и теперь вы знаете, как эти пути были обнаружены, и как исследователи до сих пор пытаются расшифровать неизвестные компоненты. Помните, обмен веществ – это хорошо, но избыток чего бы то ни было может нанести вред. Как всегда, спасибо за просмотр!