Диализ является распространенным методом, используемым в биохимии для разделения молекул на основе диффузии. При этой процедуре полупроницаемая мембрана позволяет перемещаться определенным молекулам в зависимости от размера. Этот метод может быть применен для удаления буфера, известного как обессоливание, или замены буферных молекул или ионов из белкового раствора.
В этом видео рассказывается о принципах диализа, а также об общей процедуре. Рассмотрены несколько применений диализа, включая удаление градиентных реагентов после ультрацентрифугирования, удаление детергента после экстракции мембранного белка и восстановление белков путем изменения среды раствора.
Диализ является распространенным методом, используемым в биохимии для разделения молекул на основе диффузии. При этой процедуре полупроницаемая мембрана позволяет перемещаться определенным молекулам в зависимости от размера. Этот метод может быть применен для удаления буфера, известного как обессоливание, или замены буферных молекул или ионов из белкового раствора.
В этом видео рассказывается о принципах диализа, а также об общей процедуре. Рассмотрены несколько применений диализа, включая удаление градиентных реагентов после ультрацентрифугирования, удаление детергента после экстракции мембранного белка и восстановление белков путем изменения среды раствора.
Биохимические образцы обычно имеют высокую концентрацию буфера, что может нарушить последующую обработку и анализ. Диализ является распространенным и недорогим методом, используемым для разделения молекул на основе диффузии. В методе используется полупроницаемая мембрана, которая позволяет перемещать определенные компоненты в зависимости от размера. В этом видео будут показаны концепции диализа, общая процедура, и некоторые из ее применений в биохимии.
Наиболее важным аспектом диализа является полупроницаемая мембрана, которая имеет поры, которые накладывают отсечку молекулярной массы, позволяя проходить молекулам ниже определенного размера. Например, мембрана 10k обычно удерживает молекулы размером более 10 килодальтон. Однако отсечка по молекулярной массе не является дискретной или точной границей. Мембрана обычно содержит широкий диапазон размеров пор, поэтому небольшая часть молекул вблизи порога может быть потеряна.
Поскольку предел молекулярной массы определяется с помощью глобулярных белков, линейные молекулы аналогичной массы, такие как ДНК или РНК, могут проскользнуть. Мембраны обычно выбирают от половины до одной трети молекулярной массы желаемой молекулы.
Для выполнения процедуры образец помещается в мембрану, которая, в свою очередь, добавляется в большой объем раствора, называемый диализатом. Со временем более мелкие молекулы будут свободно диффундировать через мембрану между образцом и диализатом, в то время как более крупные биомолекулы будут удерживаться внутри. Диализ – медленный процесс. Обычно его можно использовать в течение ночи или даже в течение нескольких дней.
Если диализат представляет собой чистую воду, общая концентрация буфера снижается, что известно как обессоливание. Если раствор содержит другие мелкие частицы, некоторые из них попадут в образец, что приведет к замене буфера. Поскольку диализ является равновесным процессом, диализат можно обновлять несколько раз, чтобы еще больше вытеснить малые молекулы. После завершения процесса образец повторно собирается для дальнейшей обработки.
Теперь, когда вы ознакомились с основами диализа, давайте рассмотрим общую процедуру.
Перед началом процедуры мембрану предварительно замачивают в диализе. Это облегчает его использование, и удаляет любые консерванты. Когда образец готов, его собирают, как правило, с помощью шприца, а затем добавляют в контейнер для диализа. Это может быть неизолированная трубка или содержащаяся в кассете. Лишний воздух удаляется из установки для диализа, чтобы максимально увеличить площадь поверхности образца с мембраной. Затем установку помещают в диализат с перемешиванием для максимальной диффузии. Он должен плавать, чтобы не препятствовать перемешиванию.
Диализат изменяется через соответствующие промежутки времени по мере достижения равновесия между образцом и диализатом. После последнего изменения реакцию обычно оставляют на ночь. По прошествии достаточного промежутка времени образец без буфера или с заменой извлекается из кассеты. После сбора образец может быть проанализирован или подвергнут дальнейшей обработке, в зависимости от характера эксперимента.
Теперь, когда мы рассмотрели общую процедуру диализа, давайте посмотрим, как этот метод используется в биохимии.
Градиенты плотности — распространенный способ разделения сложных биологических образцов. Эта концепция основана на распределении мелких частиц, обычно ионов сахарозы или хлорида цезия. После завершения эти реагенты обычно необходимо удалить перед обработкой собранного образца. Диализ дает возможность использовать очищенный образец для последующего анализа.
Определенные белки находятся в липидном бислое клетки и обычно изучаются путем их вкрапления в сферические липидные везикулы, известные как липосомы. Белки и липиды сначала экстрагируются с помощью моющего средства. Диализ может использоваться для медленного удаления моющего средства, образуя протеолипосомы.
После очистки некоторые белки неправильно сворачиваются или денатурируются, что приводит к потере функциональности. Соединения, вызывающие эти изменения в структуре, могут быть удалены с помощью диализа, что приводит к восстановлению функционирующих аналитов.
Вы только что посмотрели видео JoVE о диализе. Теперь вы должны понять этот метод, основанный на диффузии, простую экспериментальную процедуру, и использование этой техники.
Спасибо за просмотр!
Диализ является распространенным методом, используемым в биохимии для разделения молекул на основе диффузии. При этой процедуре полупроницаемая мембрана позволяет перемещаться определенным молекулам в зависимости от размера. Этот метод может быть применен для удаления буфера, известного как обессоливание, или замены буферных молекул или ионов из белкового раствора.
В этом видео рассказывается о принципах диализа, а также об общей процедуре. Рассмотрены несколько применений диализа, включая удаление градиентных реагентов после ультрацентрифугирования, удаление детергента после экстракции мембранного белка и восстановление белков путем изменения среды раствора.
Биохимические образцы обычно имеют высокую концентрацию буфера, что может нарушить последующую обработку и анализ. Диализ является распространенным и недорогим методом, используемым для разделения молекул на основе диффузии. В методе используется полупроницаемая мембрана, которая позволяет перемещать определенные компоненты в зависимости от размера. В этом видео будут показаны концепции диализа, общая процедура, и некоторые из ее применений в биохимии.
Наиболее важным аспектом диализа является полупроницаемая мембрана, которая имеет поры, которые накладывают отсечку молекулярной массы, позволяя проходить молекулам ниже определенного размера. Например, мембрана 10k обычно удерживает молекулы размером более 10 килодальтон. Однако отсечка по молекулярной массе не является дискретной или точной границей. Мембрана обычно содержит широкий диапазон размеров пор, поэтому небольшая часть молекул вблизи порога может быть потеряна.
Поскольку предел молекулярной массы определяется с помощью глобулярных белков, линейные молекулы аналогичной массы, такие как ДНК или РНК, могут проскользнуть. Мембраны обычно выбирают от половины до одной трети молекулярной массы желаемой молекулы.
Для выполнения процедуры образец помещается в мембрану, которая, в свою очередь, добавляется в большой объем раствора, называемый диализатом. Со временем более мелкие молекулы будут свободно диффундировать через мембрану между образцом и диализатом, в то время как более крупные биомолекулы будут удерживаться внутри. Диализ – медленный процесс. Обычно его можно использовать в течение ночи или даже в течение нескольких дней.
Если диализат представляет собой чистую воду, общая концентрация буфера снижается, что известно как обессоливание. Если раствор содержит другие мелкие частицы, некоторые из них попадут в образец, что приведет к замене буфера. Поскольку диализ является равновесным процессом, диализат можно обновлять несколько раз, чтобы еще больше вытеснить малые молекулы. После завершения процесса образец повторно собирается для дальнейшей обработки.
Теперь, когда вы ознакомились с основами диализа, давайте рассмотрим общую процедуру.
Перед началом процедуры мембрану предварительно замачивают в диализе. Это облегчает его использование, и удаляет любые консерванты. Когда образец готов, его собирают, как правило, с помощью шприца, а затем добавляют в контейнер для диализа. Это может быть неизолированная трубка или содержащаяся в кассете. Лишний воздух удаляется из установки для диализа, чтобы максимально увеличить площадь поверхности образца с мембраной. Затем установку помещают в диализат с перемешиванием для максимальной диффузии. Он должен плавать, чтобы не препятствовать перемешиванию.
Диализат изменяется через соответствующие промежутки времени по мере достижения равновесия между образцом и диализатом. После последнего изменения реакцию обычно оставляют на ночь. По прошествии достаточного промежутка времени образец без буфера или с заменой извлекается из кассеты. После сбора образец может быть проанализирован или подвергнут дальнейшей обработке, в зависимости от характера эксперимента.
Теперь, когда мы рассмотрели общую процедуру диализа, давайте посмотрим, как этот метод используется в биохимии.
Градиенты плотности — распространенный способ разделения сложных биологических образцов. Эта концепция основана на распределении мелких частиц, обычно ионов сахарозы или хлорида цезия. После завершения эти реагенты обычно необходимо удалить перед обработкой собранного образца. Диализ дает возможность использовать очищенный образец для последующего анализа.
Определенные белки находятся в липидном бислое клетки и обычно изучаются путем их вкрапления в сферические липидные везикулы, известные как липосомы. Белки и липиды сначала экстрагируются с помощью моющего средства. Диализ может использоваться для медленного удаления моющего средства, образуя протеолипосомы.
После очистки некоторые белки неправильно сворачиваются или денатурируются, что приводит к потере функциональности. Соединения, вызывающие эти изменения в структуре, могут быть удалены с помощью диализа, что приводит к восстановлению функционирующих аналитов.
Вы только что посмотрели видео JoVE о диализе. Теперь вы должны понять этот метод, основанный на диффузии, простую экспериментальную процедуру, и использование этой техники.
Спасибо за просмотр!
Videos from this collection: