Протокол для создания хронических ран у диабетических мышей

Эта модель мыши может помочь ответить на вопросы в медицинской области раны хроники. Основным преимуществом этой модели является то, что хронические раны у мышей имитируют многие аспекты хронических ран у людей. Для начала поместите мышь на чистую поверхность и удерживайте ее на месте, прищипая основание хвоста.

Затем подготовьтесь к ножницам для волос и будьте готовы быстро вытащить их, если мышь делает какие-либо внезапные движения. Бритье всю спину от шеи до хвоста, включая все вокруг хвоста. Слегка запустите лезвие против направления роста волос для наиболее эффективного разреза.

Не нажимать клиперы глубоко в кожу, как это может синяк или порез. Затем подготовь кожу к применению лосьона для депиляции. Смочите кожу пропитанным водой бумажным полотенцем, чтобы предотвратить химические ожоги.

Нажмите слегка с достаточным давлением, чтобы мокрые волосы вниз против кожи. Затем, пока кожа мокрая, руб небольшой dollop депиляции лосьон в бритой области в течение 15 до 20 секунд. После нанесения, пусть лосьон реагировать с кожей в течение 20 до 45 секунд.

Перед полоскания лосьон, слегка стереть лосьон в различных местах, чтобы проверить реакцию. Если кожа розовая и лысая, реакция завершена. Затем схвячьте мышь, чтобы смыть ее.

Используя недоминантную руку большим пальцем, нажмите на основание хвоста о ладонь и закройте другие пальцы. Затем с носом мыши вверх и от воды, пусть вода работать над спиной животного. Затем быстро, но осторожно, руб задней части мыши с другой стороны, чтобы смыть лосьон.

После удаления всех кремов для депилятуры высушите кожу бумажным полотенцем. Важно не наносить лосьон на уши, хвост или где-либо рядом с лицом. Если это должно произойти, немедленно стереть лосьон с мокрым полотенцем, а затем запустить воду над мышью, чтобы предотвратить повреждение этих областей.

Если какие-либо темные пятна заметили после использования крема, повторно крем в этих областях. Темные участки кожи будут расти волосы быстрее в течение всего эксперимента. Так клип волосы короткие каждые три-пять дней, когда это необходимо.

Патч или два, которые не более раны сайт является приемлемым, но если задняя часть мыши имеет более темные пятна, не используйте его для хронической модели раны. После удаления волос, дом мыши в одиночку, по крайней мере один день, прежде чем ранить, потому что кожа будет слишком чувствительной от лосьона для депиляции. За 30 минут до операции ввимите мышь 120 микролитров бупренорфина интреперитонически в стерильный PBS.

Все тома в этой процедуре предполагают 60-граммовую мышь. За 20 минут до операции ввимите мышь с 480 микролитров AT' intraperitoneally в стерильных PBS. Разделите громкость по обе стороны живота.

После введения АТЕ поместите мышь в небольшой пластиковый контейнер поверх теплой грелки до начала операции. Обложка небольшой контейнер с бумажным полотенцем, чтобы помочь сдержать тепло. Мышь должна успокоиться, как она нагревается.

После подтверждения анестезирования, приступить к ранению. Чтобы начать процедуру раны, спрей химии протрите 70% этанола, чтобы протереть заднюю часть мыши, чтобы очистить рану и поверхность кожи. Не протрите чрезмерно или не будет риска убийства бактерий, присутствующих на коже.

Успех модели хронической раны зависит от нестериленых состояний. Эти мыши не являются микробами бесплатно и размещены в обычном вивариуме. Бактериальный микробиом, который находится на коже имеет решающее значение для последующего начала и развития хронических ран при лечении ингибиторами антиоксидантных ферментов.

Теперь рассмотрим, где место раны. В идеале используйте спинную сторону мыши по центру и вдали от темных пятен кожи. Теперь выполните рану для перевязки процедуры в 30 до 45 секунд.

Сначала слегка нажмите семь миллиметров кожи биопсии удар на желаемое место раны и крутить удар вокруг только достаточно глубоко, чтобы оставить впечатление от удара. Затем акциз изложенных кожи, потянув вверх по центру пунш с пинцетом и резки вдоль контура с хирургическими ножницами. После завершения, крышка раны твердо с половиной кусок прозрачной пленки соусом.

В течение 10 минут после ранения, применить 60 микролитер aliquot MSA в стерильных PBS и депозит MSA местно на рану. Позже, через шесть часов после операции, вводят еще один бупренорфин. Дополнительные дозы могут быть даны по мере необходимости.

Хроническое начало раны происходит менее чем за шесть часов, и рана маржа заметно изменяется от окислительного стресса. Хроническая рана – это рана, которая остается открытой, увеличенной по сравнению с исходной раной и содержит биопленку. Через 20 дней рана находится в полной хроническости.

Биопленка формирования бактерий, которые доминируют раны сайт включают Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, а также различные стафилококки и Corynebacterium видов. Эти бактерии также находятся в человеческих хронических ран. После просмотра этого видео вы должны иметь хорошее понимание того, как создать хронические раны у мышей.

После того как вы установили эти хронические раны, вы можете использовать их для исследования многих клеточных молекулярных механизмов, участвующих в начале раны хроники.