10 августа 2018 г.
Tameness в животных включает в себя сокращение избежания ответов на людей (пассивный tameness) и увеличение в активных подходов к людям (активных tameness). Здесь мы описываем подробные протоколы для трех поведенческие тесты (активные tameness, пассивных tameness и пребывания на руку тесты) отдельно измерить активной и пассивной tameness мышей.
Этот метод может оценить уровень приручаемости у каждой мыши, и данные будут очень полезны для дальнейших исследований приручаемости, таких как генетическое картирование генов, связанных с приручаемостью. Основное преимущество этого метода заключается в том, что с помощью этого метода можно отдельно оценить два основных компонента приручения: активную и пассивную прирученность. Демонстрировать процедуру будут г-н Хиромити Нагаяма, аспирант, и г-жа Мотоко Нихэй, техник из моей лаборатории.
Для начала включите цифровую камеру и начните запись. Затем с помощью большого пинцета осторожно возьмите мышь за хвост. Перенесите мышь из домашней клетки в центр устройства для открытого поля.
После запуска секундомера поместите стрелку в нижний, левый угол аппарата. Держа ладонь вверх, медленно и неуклонно покачивайте пальцами. Медленно переместите руку к мыши и остановитесь на расстоянии 10 сантиметров от боковой части тела мыши.
Сохраняйте это расстояние, если мышь пытается отойти. Если мышь приближается к руке, держите руку в том же положении, и продолжайте двигать пальцами медленно и неуклонно. Уберите мышь свободной рукой, если она пытается забраться вверх по руке.
Через минуту завершите тест. Поместив мышь в устройство, поместите левую руку в устройство. Затем медленно и неуклонно двигайте руку к мыши и осторожно коснитесь мыши кончиками пальцев.
Продолжайте касаться мыши кончиками пальцев, пока она не отойдет. Когда мышь попытается прервать контакт, следуйте за ней рукой и снова инициируйте контакт. Завершите тест через одну минуту.
Сразу после завершения предыдущего теста с помощью большого пинцета поднимите мышь за хвост и аккуратно положите ее на левую ладонь. Аккуратно поглаживайте мышь большим пальцем левой руки, пока он не выйдет из руки. Затем положите мышь обратно на ладонь с помощью пинцета.
После третьей попытки остановите запись видео и взвесьте мышь. После возвращения мыши в домашнюю клетку запишите количество кала и мочи, оставленных в открытом поле аппарата. Далее протрите аппарат и перчатки бумажным полотенцем, смоченным в 0,2% йодофорном санитайзере, и протрите аппарат сухим бумажным полотенцем.
После назначения ключей для каждого индекса поведения запустите программу tanaMove. Далее перетащите в окно видеофайл, который нужно проанализировать. Убедитесь, что файл загружен и что информация в файле данных.
CSV-бокс правильный. Нажмите кнопку «Готово» и введите назначенные ключи для каждого индекса поведения в следующем окне. Затем нажмите кнопку «Воспроизвести», чтобы запустить видеофайл, и «Стоп», чтобы приостановить его.
Нажмите A, когда вы заметите, что мышь направляется к руке или приближается к ней. Нажмите R, когда видно, как мышь перемещается, не направляясь к руке во время теста на активное приручение. Нажмите и удерживайте W, когда звук таймера раздается на отметке 60 секунд, чтобы отметить окончание теста на активное приручение.
Когда левая рука попадет в кадр, начните анализ для теста на пассивную приручаемость. Нажмите клавишу A, когда видно, как мышь движется к руке, и R, когда мышь движется без направления к руке. Затем нажмите и удерживайте W, когда звук таймера станет слышен на отметке 60 секунд.
Запустите анализ пассивной укрощенности, когда вы заметите, как левая рука входит в кадр. Во время воспроизведения видео нажмите A, когда видно, как мышь приближается к руке, и R, когда видно, как мышь движется, не направляясь к руке. Еще раз нажмите W, когда таймер услышит отметку 60 секунд.
После этого нажимайте T каждый раз, когда мышь остается на руке во время теста. После завершения теста нажмите «Стоп». Затем нажмите кнопку «Назад», чтобы активировать новое окно, и введите новое имя файла для ввода данных CSV.
Далее нажмите кнопку «Готово», и введите соответствующие ключи в новое окно. Затем нажмите кнопку «Воспроизвести», чтобы перезапустить видео и начать анализ теста на активное приручение. Во время воспроизведения видео нажимайте T всякий раз, когда мышь добровольно контактирует с обработчиком.
Когда таймер покажет отметку 60 секунд, нажмите и удерживайте W. Во время теста пассивной прирученности нажмите T, когда мышь позволит оператору коснуться своего тела. Затем нажмите и удерживайте W, когда таймер прозвучит через 60 секунд. После этого нажмите кнопку «Стоп», а затем кнопку «Назад», прежде чем вводить имя файла для вывода данных CSV.
Далее нажмите кнопку «Готово», чтобы активировать новое окно для ввода назначенных ключей. Затем нажмите «Играть», чтобы начать активный тест на приручение. Когда вы заметите, как мышь прыгает, нажмите J. Затем нажмите W, когда таймер прозвучит через 60 секунд.
Нажмите кнопку «Стоп», чтобы остановить видеонаблюдение и таймер снова зазвучит через 60 секунд. Затем нажмите кнопку «Назад» и введите имя файла для вывода данных CSV. Затем сохраните все файлы с исходными данными в папке, содержащей два дополнительных файла.
Откройте файл дополнительных двух и нажмите кнопку Суммировать. Наконец, сохраните результаты в виде отдельного файла для дальнейшего анализа. С помощью селекционного разведения были получены мыши с высоким уровнем активной прирученности.
Мыши из селекционных групп разведения набрали больше баллов в тесте Active Tameness, демонстрируя более длительную продолжительность контакта с человеческой рукой, чем контрольные мыши. Мыши из двух групп существенно не различались по движению, передвижению или продолжительности прыжков. Тем не менее, выбранные мыши набрали более высокие баллы в тесте на пассивную приручаемость.
Кроме того, выбранные мыши оставались на человеческой руке значительно дольше, чем контрольные мыши в тесте Stay-On-Side. Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить, что не следует обращаться с мышами до проведения теста на приручение, так как опыт обращения может значительно повлиять на приручаемость каждой мыши.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
В данной статье представлены протоколы оценки приручаемости у мышей с акцентом как на активную, так и на пассивную приручаемость. Описанные методы предназначены для комплексной оценки того, как мыши взаимодействуют с человеком.
Оценка поведенческих черт, таких как приручаемость, в доклинических моделях способствует валидации мишеней, позволяя снизить риски, связанные с механизмами нейропсихиатрических и нейроонтогенетических путей. Раздельное количественное определение активных и пассивных компонентов повышает прогностическую уверенность при идентификации трансляционных биомаркеров и выборе линий для терапевтического скрининга.
Данный метод интегрируется в рабочие процессы открытий в биологии, обеспечивая измеримые результаты для проверки гипотез и уточнения путей в поведенческой генетике.