Клинический протокол производства жировой ткани производные стромальные сосудистой дроби для потенциальных регенерации хряща

Остеоартрит является одним из наиболее распространенных изнурительных расстройств среди пожилых людей. В настоящее время нет определенного лечения основных причин остеоартрита. Этот клинический протокол описывает инновационную процедуру для перспективных, минимально инвазивных, и альтернативное лечение остеоартрита коленного сустава человека путем регенерации хряща, как ткань.

Остеоартрит является одним из наиболее распространенных изнурительных расстройств среди пожилых людей. В настоящее время нет определенного лечения для подлетонирования причин остеоартрита. Этот клинический протокол является инновационной процедурой для перспективных, минимально инвазивных и альтернативных методов лечения остеоартрита коленного сустава человека путем регенерации хряща, как ткани.

Принесите пациента в операционную с капюшоном класса А, и поместите его или ее в положение лежа. Очистите брюшную область пациента 5%бетадин-повидиной йодом и драпировать пациента с помощью стерильной техники, обнажая чистую область живота для липосакции. Приблизительно пять сантиметров вывод-позже от umbilicus, анестезировать два участка, один слева, а другой на правой стороне umbilicus разреза, которые должны быть сделаны.

Использование двух миллилитров 2%лидокаина без эпинефрина с 25-го калибра 1,5 дюймовый иглы в пяти миллилитр шприц путем введения каждого сайта на эпидермальной уровне. Обезболить участок разреза, который будет сделан с помощью пяти миллилитров тумесцентного раствора и 10 миллилитров шприца и иглы 25-го калибра 1,5 дюйма. Сделайте два разреза по 0,5 сантиметра примерно на пять сантиметров ниже умбиликуса сбоку, ущипнув кожу, чтобы поднять глубину подкожного уровня.

Используя лезвие номер 11, помогите поднятой коже проникнуть на подкожный уровень, но не проникнуть через брюшную стенку. С помощью 20 сантиметров 60-калиберной канюли, анестезировать подкожный уровень всей нижней части живота, которая должна быть липосакции с 700 до 800 миллилитров тумесцентного раствора. После завершения инфильтрации всей нижней части живота с тумесцентным раствором, подготовить липосакционный аппарат, подключив 3,0-миллиметровую канюлю, соединенную с 60 миллилитровым или 30-миллилитровым шприцем для ручной липосакции или специально разработанной 3,0-миллиметровой канюли, подключенной к набору центрифуг.

Закрытый системный шприц, разработанный нами и одобренный FDA CDRH с целью поддержания бесплодия, подключенного к вакуумной машине для вакуумной липосакции. Выполните липосакцию, чтобы получить от 100 до 110 граммов жировой ткани, исключая тумесцентный раствор. При выполнении липосакции, жировой ткани будут получены вместе с тумесцентным раствором, но должны быть разделены и удалены.

Для того чтобы отделить тумесцентный раствор сперва гравитацией, жировая ткань в наборе центрифуги может быть перенесена к шприцу 60 миллилитров и поместит шприц вниз. Например, открывающая часть шприца находится внизу. По прождав пять-шесть минут, жировая ткань и тумесцентный раствор будут разделены.

Удалите жидкость в нижней части шприца, нажав на верхней части поршеня шприца. Выполните вышеуказанные шаги от 9 до 11 до тех пор, пока в общей сложности от 100 грамм до 110 грамм жировой ткани липидного аспирата на колено не было накоплено. После разделения тумесцентного раствора по гравитации и накопления от 50 грамм до 55 грамм липидного аспирата на каждые 60 миллилитров центрифуг комплект стерильной закрытой системы, поместите две центрифуги комплекты в центрифугу контейнер ведро и спина на 1600 G в течение пяти минут, конденсации липидов аспирата и отделения жидкости из жировой ткани.

Этот процесс дополнительно конденсирует липидный аспират и может производить жирное масло в некоторых случаях. Будьте осторожны, чтобы не встряхнуть, удалить крышку безопасности и вилку в нижней части комплекта центрифуги. Удалите нижнюю жидкость, медленно толкая вниз на верхней части поршеня центрифуги комплекта.

На отдельном 60 миллилитровом шприце растворяют 10 миллиграммов коллагеназы, пять миллиграммов коллагеназы, специфичные для соединительной ткани, и пять миллиграммов коллагеназы, специфичных для жировой ткани с 50 миллилитров нормального солевого раствора. Смешайте примерно от 25 до 30 миллилитров конденсированного липидного аспирата с растворенным коллагеназой, пятью миллиграммами коллагеназы, специфичными для соединительной ткани, и пятью миллиграммами коллагеназы, специфичными для жировой ткани, в соотношении один к одному, объем к объему, путем подключения 60 миллилитрового шприца к набору центрифуг с помощью специализированного разъема. Тщательно перемешать, чтобы конденсироваться подготовительный аспират и коллагеназу, нажав содержимое между 60 миллилитров шприц и набор центрифуги с помощью стержня или толкатель.

Перенесите смесь липидного аспирата и коллагеназы обратно в 60 миллилитровый шприц. Соедините каждый 60 миллилитровый шприц, содержащий смесь с гомогенизатором тканей, который содержит лезвия. Подключите пустой 60 миллилитровый шприц к другому концу гомогенизатора.

Нажмите смесь на другой 60 миллилитров шприц через гомогенизатор в течение четырех-шести раз, в результате чего резки и mincing липидного аспирата. Перенесите однородный липидный аспират и коллагеновую смесь обратно в набор центрифуг на 60 миллилитров через специализированный разъем. Поместите наборы центрифуг в контейнер, который будет помещен в инкубатор, который был разогрет при 37 градусах по Цельсию.

Инкубировать две центрифуги комплекты с однородной смесью при 37 градусов по Цельсию в течение 40 минут при повороте при 45 об/мин. После 40 минут инкубации, удалить контейнер из инкубатора в стерильной моды. Затем удалите наборы центрифуг и поместите их в центрифугу машины.

Центрифуга смеси на 800 G в течение пяти минут, чтобы отделить жировой ткани полученных SVF. После центрифуги, супернатант, который включает в себя коллагеназы и переваренной жировой ткани удаляется из каждой центрифуги комплект, удалив крышку шприца на вершине поршень и размещение 30 миллилитров шприц на поршень открытия через шприц-замок соединения. Медленно нажмите на баррель часть 30 миллилитров шприца для супернатанта, чтобы заполнить в 30 миллилитров шприц.

Нажмите вниз 30 миллилитров шприц баррель вплоть до последних трех-четырех миллилитров нижней части комплекта центрифуги, оставив только последние три-четыре миллилитров жировой ткани полученных SVF. Супернатант отбрасывается. Удалите 30 миллилитров шприц из верхней части поршеня и заполнить шприц с 5%dextrose лакированный раствор звонаря, также известный как D5LR.

Прикрепив 30 миллилитров шприца, наполненного D5LR на верхней части отверстия поршеня, заполните центрифуги комплекты, содержащие от трех до четырех миллилитров жировой ткани полученных SVF с D5LR до 55 миллилитров. Затем удалите 30 миллилитров шприц, крышка поршень открытия, и центрифуга центрифуги комплекты снова на 300 G в течение четырех минут. Повторите шаги номер 17 на номер 21 в общей сложности четыре стирки.

После четвертой центрифуги, для того, чтобы получить окончательный SVF для инъекций, удалить крышку безопасности и вилку в нижней части открытия центрифуги комплект без встряхивания или поворота центрифуги комплект. Прикрепите 20 миллилитров шприц к открытию нижней части комплекта центрифуги с помощью специально разработанного разъема. Потяните поршень 20 миллилитров шприца несколько раз вперед и назад, чтобы встряхнуть клетки, которые поселились на дне комплекта центрифуги.

Удалите желаемый общий объем SVF, содержащий как ASTs, так и ECM вместе с другими клетками и тканями. Обычно около трех-четырех миллилитров от каждой центрифуги комплект для инъекций коленного сустава. Мы сделали 30 миллилитров аутологичной крови вместе с 2,5 миллилитров раствора антикоагулянта цитрат декстрозы.

Затем нарисованная кровь была перенесена в наборы для бочки с центрифугой 60 миллилитров. Затем он был центрифугирован на 730 тяжести в течение пяти минут. А супернатант сняли и положили в новый набор для бочки с центрифугой на 60 миллилитров.

Супернатант был центрифугирован на 1350 гравитации в течение четырех минут, получив 4,4 миллилитров PRP. Очистите колено пациента 5%бетадином и драпировать его стерильным способом. Пальпировать передней части колена для совместного пространства между рыбий и бедренной костей.

Обезболить место инъекции поверхностно с разбавленным лидокаином, один миллилитр 1%лидокаин разбавлен четырьмя миллилитров нормального солевого раствора, от кожи до просто за пределами суставной капсулы. Затем обезболивать внутреннюю часть совместной капсулы с разбавленным ropivacaine, один миллилитр 0,75%ropivacaine разбавленной тремя миллилитров нормального солевого раствора. Смешайте два миллилитра HA с шести-восьми миллилитров SVF, содержащихся в 20 миллилитров шприц через шприц для разъема шприца.

Используя шприц для разъема шприца, добавьте 0,4 миллилитров хлорида кальция в три-четыре миллилитров аутологичной PRP, которая уже подготовлена и готовится в пятими миллилитровом шприце. Комбинат от 3,5 до 4,5 миллилитров PRP хлорида кальция в пять миллилитров шприц с 8 до 10 миллилитров смеси HA-SVF в 20 миллилитров шприц через шприц для разъема шприца. Немедленно введите смесь, около 12 до 15 миллилитров, медленно в передней трибиально-бедренной сустава колена, используя 38 миллиметров 18-го калибра иглы с или без ультразвукового руководства.

После инъекции перевязать место инъекции с давлением, складывая 4x4 ватной марли четыре раза и размещение ленты над сложенной марлей 4x4. Проинструктируйте пациента оставаться на месте в течение 60 минут, чтобы обеспечить вложение клеток. Поручить пациенту ограничить деятельность в течение как минимум одной недели после выписки из клиники.

Возвращение в клинику для трех дополнительных инъекций PRP активируется хлорида кальция в течение трех недель. Пациент с 3-й стадией ОА получил лечение, как описано в разделе протокола. После второй недели инъекции смеси ASV-ECM боль пациента и ПЗУ улучшились.

К 16-й неделе боль пациента и ПЗУ значительно улучшили более чем на 70% после лечения МРТ, принятого после 16-й недели, показали повышенную толщину хрящевой ткани на медиальной стороне колена. Другой пациент с 3-й стадией ОА получил лечение, как описано в разделе протокола. После второй недели инъекции смеси ASV-ECM боль пациента и ПЗУ улучшились.

К 18-й неделе боль и ПЗУ значительно улучшились до 80%Повторная МРТ, сделанная после 18-й недели, показала увеличение высоты хрящевой ткани на передней медиальной стороне колена. Третий пациент с третьей стадией ОА получил лечение, как описано в разделе протокола. После второй недели инъекции смеси ASV-ECM, боль пациента и ROM улучшились примерно на 50%К 22-й неделе, боль и ROM значительно улучшились более чем на 80% Повторная МРТ, сделанная после 22-й недели, показала увеличение высоты хрящевой ткани на медиальной стороне колена.

В настоящее время никакой лечебной терапии для лечения ОА не существует. Тем не менее, перкутанная инъекция терапии стволовыми клетками с ASCs и однородной ЭКМ вместе с HA и аналогичной PRP активируется хлоридом кальция может обеспечить альтернативу текущей терапии лечения коленного ОА.