May 10th, 2019
Brainstem вызвал ответ аудиометрии является важным инструментом в клинической нейрофизиологии. В настоящее время, ствол вызываемых ответ аудиометрии также применяется в фундаментальной науки и доклинических исследований с участием как фармакологических и генетических моделей животных. Здесь мы предоставляем подробное описание того, как слуховые ответы ствола мозга могут быть успешно записаны и проанализированы у мышей.
Этот протокол предоставляет подробную информацию о том, как планировать, осуществлять и анализировать нажмите и тон-взрыв вызвал слуховые реакции ствола мозга у мышей. Основным преимуществом этой методики является то, что она позволяет сложное и быстрое слуховое профилирование фармакологических и мутантных моделей мышей. Новые идеи в alt-er-ed раннего APP и связанные с этим изменения в слуховой обработки у мышей и крыс могут быть переведены на людей.
Таким образом, этот метод имеет центральное значение в характеристике и фенотипирование слуховых, неврологических и заболеваний. Этот метод является наиболее важным для выявления дисакуса, гипоакусиса и анакусиса. Например, в возрастной, вызванной шумом метаболической, врожденной и аспи-мет-акуриной потере слуха, а также при дефиците слуха из-за деформаций или пороков развития, травм и неоплазм.
Пользователям, новым для техники, следует обратить особое внимание на правильное электрорас размещение и доимо экспериментальную калибровку системы. Визуальная демонстрация метода имеет решающее значение для иллюстрации анестезии, записи ABR, процессов фильтрации ABR и автоматизированных ABR neur-o-lass-es. Начните с предварительного усилителя, подключенного к микрофону, по крайней мере за пять минут до калибровки, чтобы обеспечить равновесие системы.
Включите осциллоскоп. Затем расположите микрофон, подключенный к предварительному усилителю внутри звуковой затухающих кубических, чтобы имитировать экспериментальное ухо мурина. Далее откройте коммерчески доступные программы обработки и приобретения и запрограммировать протоколы стимулов для кликов и очередей тона.
Начните с нажмите стимулом лица для анализа и определения пороговых значений кликов. Затем ABR симметрии левого и правого уха. И АМплуды ИБР позже.
Далее, используйте то же программное обеспечение для проверки протокола стимуляции всплеска тона с помощью программного обеспечения sig-Gen RZ. И проверяет настройки стимулов, в соответствии с программным обеспечением для приобретения Bio-Sig РЗ. Программа соответствующего диапазона частот, которые будут протестированы, в зависимости от научного вопроса, и убедитесь, что частотные диапазоны, которые будут применяться отвечают техническим возможностям громкоговорителя.
Для усреднения установите количество последовательных стимулов акустики, кликов или очередей тона, например, в 300 раз, со скоростью 20 в секунду; в среднем продолжительность 25 миллисекунд и коэффициент усиления предварительного усилителя, 20 раз. Затем проясняйте соответствующую скорость выборки для получения данных ABR, а затем пройте фильтр с помощью фильтра стоимостью в шесть опросов. При необходимости активируйте фильтр выемки.
Начните калибровку всплеска тона, выбрав калибровку:CAL200K файл;в программном обеспечении, чтобы активировать режим конфигурации калибровки. И выбирать периметры в соответствии с экспериментальными условиями. Используйте процессорную систему для выполнения процедуры калибровки.
Убедитесь, что технические характеристики микрофона и громкоговорителя, с точки зрения уровня звукового давления или пределов SPL, частотного диапазона и распределения гармонизированы. Затем выберите и запустите заранее определенный протокол стимуляции кликов. Выполнить один клик SPL, чтобы убедиться, что спектр звуковых стимулов анализируется онлайн быстро четыре-ай преобразования осциллоскопа, соответствует требованиям.
Выберите и запустите заранее определенный протокол стимуляции всплеска тона, в пределах от одного до 42 килогерц. Подтвердите частотный спектр записанных акустических тестовых стимулов, используя осциллоскоп и онлайн FFT. Наконец, завершите калибровку всплеска тона, загрузив созданный файл калибровки на протокол стимула взрыва тона.
Начните с размещения обезболивающей мыши внутри звукоуместимой кабины, облицованной акустической пеной. Для записи monaural ствол мозга вызвал слуховые потенциалы, вставить суб-дермальной нержавеющей стали электродов на вершине, ось пин-глаз и брюшной боковой правой или левой пинна в зависимости от уха, которые будут измерены. С другой стороны, для бинауральных записей, поместите отрицательные электроды как в правую, так и в левую пину.
Располагаем наземным электродом на бедре животного. Перед вставкой, сформировать форму крючка на кончике электрода из нержавеющей стали, что суб-дермальной фиксации электродов гарантируется. А после вставки правильно поместите трибуну мыши на 10 сантиметров напротив громкого динамика.
Подключите все электроды к головной сцене и проверьте их неприступенность. Затем, выполнить измерения невыполнения всех электродов, до каждой записи, чтобы проверить надлежащее позиционирование электродов и проводимости. Запись ABRs в условиях свободного поля с помощью одного громкого динамика.
Наконец, провести анализ ABR с помощью автоматизированного обнаружения пороговых значений и анализа задержки волн для определения положительных пиков и отрицательных волн. В качестве первого шага в анализе общей производительности слуха, клик-вызванных ABRs для различных SPLs, между нулем и 90, были исследованы с помощью автоматизированной системы обнаружения порога ABR. Были проанализированы потенциальные изменения пороговых уровней ABR, вызванные различными частотами всплеска тона.
В образцовых линиях мыши, Cav3.2 плюс, минус и Cav3.2 минус, минус выставлены увеличение щелчка и тон взрыв связанных порогов слуха по сравнению с управления. Наконец, функция роста амплитуды ABR и анализ задержки волновой формы ABR проводились с помощью волнового подхода. Последнее позволяет понять возможное спасио-временное влияние гена интереса на слуховую обработку информации внутри внутреннего уха и ствола мозга.
Правильное размещение электродов ABR в измерении Пинна и калибровка системы имеют важное значение для выполнения этой техники. Представленный здесь слуховой подход также может быть использован в сочетании с системой телеметрии для анализа сложных, среднесрочных и поздних слуховых потенциалов. Это помогает в характеристике и в фенотипирование слуховых, неврологических и неврологических заболеваний.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Это исследование подробно описывает использование аудиторной стволовой реакции (ABR) аудиометрии у мышей для анализа слуховой обработки и ее влияния на неврологические состояния. Протокол описывает методы измерения вызванных откликов на щелчки и тоновые всплески, что позволяет исследователям лучше понять слуховые дефициты в различных генетических и фармакологических моделях мышей.
ABR in mice enables high-throughput auditory phenotyping for target validation in neurological and sensory drug discovery. The method supports mechanistic de-risking by linking genetic or pharmacological manipulations to quantifiable auditory phenotypes. This facilitates early go/no-go decisions in preclinical portfolios focused on hearing loss, neurodegeneration, or neurodevelopmental disorders.
ABR fits within the discovery continuum from target hypothesis testing to lead identification and preclinical efficacy assessment, particularly for CNS and sensory therapeutics.