Проектирование автоматизированных, высокая пропускная способность, непрерывный рост клеток эксперименты с использованием Эволюционивер

eVOLVER дает исследователям экспериментальную свободу, возможность определять свои собственные эксперименты роста культуры с автоматизированной обратной связью по нескольким параметрам и масштабировать ее до любого размера, который им нужен. eVOLVER является более гибким, чем другие устройства. Пользователи могут легко настроить программное обеспечение в Python, а также аппаратное обеспечение, путем изменения умных рукавов, которые держат датчики для каждой культуры.

Система может показаться сложной на первый взгляд с несколькими компонентами и соединениями. Визуальное руководство дает пользователям впервые больше уверенности в самостоятельном запуске экспериментов. Правильная настройка имеет решающее значение.

Не забудьте понять, что делает каждый компонент. Таким образом, вы можете подтвердить, что они работают. Убедитесь, что все правильно и тесно связано.

В то время как предназначен для аэробного культивирования бактерий и дрожжей в различных условиях, eVOLVER также может быть изменен для анаэробного брожения или для поддержания клеток млекопитающих в подвеске. Это видео продемонстрирует, как настроить, инициализировать и запустить высокую пропускную способность непрерывного культурного эксперимента с помощью платформы eVOLVER. За день до эксперимента подготовь средства массовой информации, флаконы и инокулум в соответствии с рукописью.

В трех больших стаканах приготовьте два стакана по 10% отбеливателя и один стакан из 70% этанола. Используя выключатели на устройстве eVOLVER, включите пятивольтовое питание на eVOLVER, подождите пять секунд, затем включите 12 вольт питания. При запуске нескольких флаконов из одной и той же бутылки мультимедиа подключите несколько линий ввода мультимедиа с трубчатыми сплиттерами.

Пользовательские трубные сплиттеры могут быть построены с более низкими компонентами. Погрузите линии ввода мультимедиа в первый стакан отбеливателя и линии медиа-эфлюкса во втором стакане отбеливателя. Подключите нижний конец линий ввода мультимедиа ко второму стакану с линиями eflux.

Поместите линии отходов в отходы carboy. Добавьте один-два литра отбеливателя в отходы carboy стерилизовать отходы, образуюсь в ходе эксперимента. Используя сенсорный экран на eVOLVER, перейдите в раздел установки и запустите все насосы в течение 20 секунд, чтобы заполнить линии жидкости с 10%bleach.

Разрешить отбеливатель сидеть в очередях, по крайней мере 30 минут, чтобы стерилизовать. Запустите насосы снова с помощью сенсорного экрана, пока линии больше не погружаются, толкая воздух через линии, чтобы получить как можно больше отбеливателя, как это возможно. Поместите линии ввода мультимедиа в стакан этанола, заполните линии этанолом, промойте их воздухом.

Затем прикрепите линии ввода мультимедиа к медиа-бутылкам с нижними разъемами и запустите насосы до тех пор, пока средства массовой информации полностью не пробегут через линии, промывки любого остаточного этанола. Частично вставьте стерилизованные флаконы в смарт-рукава eVOLVER и подключит входные линии к короткой соломе притока и линиям отходов к длинному eflux strawq в соответствии с цветовой кодировкой. Отрегулируйте на сенсорном экране eVOLVER для запуска всех насосов в 10 секунд шагом, чтобы заполнить флаконы со средствами массовой информации.

Обеспечить визуальный осмотр, eflux насосы эффективно удаления средств массовой информации через eflux соломинки для предотвращения переполнения. Затем, нажмите флаконы вниз, пока полностью заключены смарт рукав. На интерактивной странице интерактивной настройки сенсорного экрана eVOLVER перетащите палец через сенсорный экран или нажмите кнопку Select All, чтобы выбрать все флаконы и установить начальные условия температуры на уровне 30 градусов по Цельсию и перемешать до 10.

На компьютере укажите устройство eVOLVER, на которое будет работать эксперимент. Убедитесь, что были выбраны желаемые настройки калибровки. Откройте панель мониторинга eVOLVER и перейдите на страницу Experiment Manager.

Выберите базовый эксперимент в панели Experiment Navigator или существующий эксперимент в качестве отправной точки и нажмите Клон. Перейдите на страницу редактора эксперимента. Используйте панели Vial Selector и Параметр определения, чтобы настроить температуру до 30 градусов по Цельсию и установить верхний и нижний порог OD для каждого флакона в соответствии с экспериментальной конструкцией.

Сохранить эксперимент, нажав Сохранить. Затем нажмите на стрелку, чтобы вернуться на страницу Менеджер эксперимента и нажмите кнопку Воспроизведение для запуска. После начала эксперимента перейдите на панель данных в режиме реального времени в интерактивной панели мониторинга.

Для каждого флакона проверьте, что значения OD держатся на нуле. Просмотрите графики температуры, чтобы проверить, что температура находится на уровне или прогрессирует к 30 градусов по Цельсию. Чтобы подготовить инокулум, сначала измерьте OD ночных культур и вычислите желаемое полное разбавление для ночных культур, предполагая объем флакона 25 миллилитров и желаемый стартовый ОД около 0,05.

Через порт отбора проб, пипетка рассчитывается объем инокулы или смеси инокулы. Проверьте графики на приборной панели, чтобы увидеть, что OD увеличивается до 0,05. Рост клеток и состояние флакона можно контролировать в режиме реального времени, как эксперимент продолжается, что позволяет исследователю вмешаться, если какие-либо проблемы возникают.

eVOLVER - это автоматизированная платформа непрерывной культуры, позволяющая многопараметровый контроль культурных условий. Квалификационные различия были показаны между диким типом, чувствительными к температуре и чувствительными к соли группами, когда коэффициенты журнала были построены против поколений, интерполированных из данных о темпах роста eVOLVER. Цвет указывает на температуру отбора, в то время как тире различать концентрации соли.

Наклон, протяжаемый через линейную часть каждого участка, используя минимум три точки, дает количественное значение пригодности, которое описывает, как штамм варианта конкурирует с эталонным штаммом. Отрицательные значения пригодности показывают что напряжение варианта out-competed напряжением справки. Всегда проверяйте, что все насосы работают эффективно и что линии жидкости не подальше от любых засоров.

Переполнение может разрушить эксперимент и потенциально повредить умные рукава. Образцы, взятые из eVOLVER, могут быть впоследствии секвенированы для проверки геномных изменений в результате эксперимента. Эта информация может быть использована для инженера новых штаммов или систем.

Для исследователей, использующих эволюцию лаборатории или выбор библиотеки, легко применять уникальное давление отбора в каждом эксперименте eVOLVER. Контроль обратной связи и динамические среды теперь также очень доступны. Отходы carboy будет содержать небольшое количество отбеливателя и этанола после эксперимента.

Проконсультируйтесь со своим координатором по безопасности лаборатории для надлежащей утилизации отходов.