Мульти-Волокно Фотометрия для записи нейронной активности в свободно движущихся животных

Волокно фотометрии CSOM изображения сочетает в себе генетически закодированный пользовательский индикатор и оптические волокна для мониторинга нейронной активности в свободно движущихся животных. Что имеет решающее значение для понимания того, как определенная группа нейронов играть в руководстве или реагирования на действия или стимул. Этот метод является доступным способом записи из конкретных областей мозга, которые определяются их связи или генетических профилей, со встроенным контролем, чтобы отделить сигнал к шуму.

Демонстрацией процессора будет Екатерина Марсьянова, аспирантка моей лаборатории. Начните с ослабления всех винтов на пятиосевом переводчике. Винт в шнуре патча к адаптеру, который прикреплен к пятиосевому переводчику.

Затем включите 470 нанометровый свет возбуждения при низкой мощности и распоите кончик волокна, указывая на автоматическую флуоресцентную пластиковую горку. Следующая запись с бесплатного полупроводника оксида металла или камеры CMOS в режиме живого времени. Увеличьте выигрыш или отрегулируйте таблицу осмотра до тех пор, пока изображение не будет видно в координационном центре цели.

Заранее пять оси переводчика к цели обеспечения того, чтобы 470 нанометровый свет по центру на волокна на SMA или FC конце патч шнура, пока изображение не может быть решена на камеру. Наконец, отрегулируйте оси X и Y до тех пор, пока изображение не будет по центру и не будет хорошо решено. Визуализуй свет, излучаемый вариолным концом шнура патча, так как он должен выглядеть как изотропный круг.

Начните с включением всех возбудимых огней, чтобы лучше визуализировать волокна. И настроить камеру выгоды так, что нет пикселей насыщены, и четкое изображение волокон присутствуют. Затем сделай предварительный снимок.

Нарисуйте области интереса или ROIS вокруг волокон. И держать их для измерения средних значений интенсивности во время записи. Для нескольких волоконных записей, тест для независимых путем живой записи из всех волокон.

Навельсив одно волокно к источнику света и нажмите пальцем. Наблюдайте колебания в канале. Затем нанесите цветную ленту на конец волокон, чтобы обозначить, какая рентабельность инвестиций соответствует какому волокну.

Наконец, настроить область записи, повесив патч шнур над ареной с помощью стендов, зажимов и держателей. Наконец, убедитесь, что животное не будет ограничено в движении по длине волокна и может свободно перемещаться по всей арене. Начните с осмотра дистального конца волокон шнура патча на глаз, и с мини-микроскопом волокна.

Если поверхность волокон поцарапана, повторно отполировать волокна с помощью волокна полировки пленки с тонкой песка. Затем очистить дистальные концы шнура патч с 70%этанола и хлопка наконечник аппликатора. Очистите волоконно-оптические канюли с использованием 70% этанола и хлопчатобумажного наконечника аппликатора.

Подключите вариольной конец шнура патча к имплантированной клетчатке с помощью керамического сплит-рукава, покрытого черной сужающейся трубкой. Во время соединения убедитесь, что рукав плотный. Позвольте животному восстановиться в течение нескольких минут.

Затем начните записывать оптический сигнал и запустите эксперимент. Во время записи внимательно следите за живым следом, чтобы обеспечить качество записи. И следите за любыми прыжками в сигнале, указывая на то, что рукав недостаточно плотный.

Для двухцветных записей добавьте светодиод 516 нанометров в систему фотометрии, чтобы возбудить красный флуоресцентный датчик кальция, а также соответствующие дихроические зеркала и фильтры. Затем добавьте сплиттер изображения между целью и камерой CMOS, чтобы отделить зеленые и красные длины волны излучения. Наконец, рисовать ROIS вокруг всех волокон в обоих цветах, красный и зеленый.

Убедитесь в том, чтобы четко определить каждую рентабельность инвестиций с соответствующим волокном и каналом. Триггер одновременного возбуждения с 470 нанометров, и 560 нанометров светодиодов, и чередовать их с 410 нанометров светодиод. Результаты показывают, что измеренная флуоресценция значительно увеличилась одновременно с администрированием воздушных затяжек для мышей с активацией пути LHA-LHB.

Однако у мышей, выражаюющих зеленый флуоресцентный белок или GFP, никаких изменений в сигнале не было обнаружено во время введения воздушных клубы. Этот метод позволяет исследователям разумно записывать из определенного типа клеток в различных областях мозга. В то время как животное свободно ведет себя.

Это еще больше обувяет способность вскрывать функции этих областей мозга, поскольку они связаны с поведением.